[发明专利]GSK503在制备治疗视网膜母细胞瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于视网膜母细胞瘤的治疗领域，特别涉及一种GSK503在制备治疗视网膜母细胞瘤药物中的应用。

背景技术

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma，RB)是儿童最常见的眼内恶性肿瘤，常在发育过程中发生发展，是一种起源于视网膜核层的胚胎性恶性肿瘤。该肿瘤具有家族遗传倾向，是婴幼儿眼病中性质最严重、危害性最大的一种恶性肿瘤，其视觉预后较差，且容易发生颅内及远处转移，常危及患者生命。

目前，针对该肿瘤的治疗主要为手术和放化疗等非病因治疗，缺乏针对其病因的治疗手段。Zeste基因增强子同源物2(EZH2)为多梳蛋白复合体(PcG)家族的成员之一，是多梳蛋白抑制复合体2(PRC2)的催化活性亚单位。EZH2是细胞内的一种组蛋白甲基转移酶，它可促进细胞内组蛋白H3的第27个氨基酸上三甲基(H3K27me3)的甲基化，并被证明是一种原癌基因，与多种肿瘤的生长和转移相关。EZH2可通过提高细胞中H3K27me3甲基化水平，抑制抑癌基因表达，从而导致肿瘤发生。GSK503是一种新型的EZH2小分子抑制剂，它被证实在皮肤恶性黑色素瘤中可显著抑制肿瘤的生长和转移，并对正常黑色素细胞无显著影响，因而被认为对肿瘤治疗有较好的前景。但迄今为止，尚没有GSK503在视网膜母细胞瘤中应用的报道，其对视网膜母细胞瘤的疗效和作用机制尚不清楚。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种GSK503在制备治疗视网膜母细胞瘤药物中的应用，该发明旨在为视网膜母细胞瘤的临床治疗提供新的靶点和治疗药物，提高治疗有效性，降低眼球摘除率，提高患者视觉预后。

本发明的GSK503在制备治疗视网膜母细胞瘤药物中的应用，化学结构式如式I所示，

优选地，所述的药物中GSK503终浓度大于或等于1μM。

优选地，所述的药物中GSK503终浓度为1-10μM。

优选地，所述的药物中GSK503终浓度为1、5或10μM。

GSK503是一种新型的EZH2小分子抑制剂，分子式为C₃₁H₃₈N₆O₂，分子量526.67g/mol,分子结构式(如式I所示)。申请者实验发现，GSK503能显著抑制视网膜母细胞瘤的生长，通过抑制EZH2，使细胞内H3K27me3甲基化程度降低，从而使抑癌基因重新表达，达到抑制肿瘤生长的效果。

有益效果：

GSK503终浓度达到1μM即可达到有效的治疗浓度，且药物作用效果随着浓度升高而增加，可显著抑制视网膜母细胞瘤生长。

附图说明

图1为将RB组织与眼正常组织进行免疫荧光的实验结果图。

图2为染色质免疫沉淀实验结果图，其中A为RB44对照细胞及与GS503处理的RB44细胞对比的染色质免疫沉淀PCR结果图，B为A图的定量分析结果图。

图3为RB44细胞在不同终浓度GS503处理后的增殖实验结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

免疫荧光实验

实验材料：视网膜母细胞瘤组织芯片(含28例视网膜母细胞瘤组织，12例眼正常组织)，购自西安艾丽生物科技有限公司；H3K27me3抗体及第二抗体，购自Abcam(艾博抗(上海)贸易有限公司)。

将组织芯片置于湿盒内，铺加PBS于组织芯片上。稀释的H3K27me3抗体于4℃，13500g离心2min。在组织芯片的一端吸去玻片上的PBS缓冲液，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1h。以PBS冼玻片3次(5min/次)，从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。稀释的第二抗体于4℃，13500g离心2min。将第二抗体加于组织芯片上，置加湿盒中室温温育1h，以PBS洗玻片3次(5min/次)。盖盖玻片，显微镜下观察结果(见图1)。从图1中可以得出，通过对视网膜母细胞瘤的组织芯片进行H3K27me3免疫荧光染色，证实视网膜母细胞瘤组织中H3K27me3甲基化程度相较正常组织显著升高。

实施例2

染色质免疫沉淀技术(ChIP)实验