[发明专利]在枯草芽孢杆菌中高效表达普鲁兰酶的方法及重组枯草芽孢杆菌有效
| 申请号： | 201710032183.9 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN106754833B | 公开（公告）日： | 2020-06-09 |
| 发明（设计）人： | 李阳源;王建荣;杨玲;瞿曼;陈丽芝;黄佳乐 | 申请（专利权）人： | 广东溢多利生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/44 | 分类号： | C12N9/44;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京法信智言知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人： | 刘静荣 |
| 地址： | 519060 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 枯草 芽孢 杆菌 高效 表达 普鲁兰酶 方法 重组 | ||
1.一种在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中高效表达普鲁兰酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
构建碱性蛋白酶和中性蛋白酶缺失的枯草芽孢杆菌菌种；
构建包含启动子、信号肽和普鲁兰酶基因的表达载体；
将上述构建的表达载体转入碱性蛋白酶和中性蛋白酶缺失的枯草芽孢杆菌菌种，培养获得普鲁兰酶，
其中，所述启动子为选自核苷酸序列如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16或SEQ ID NO.17所示杂合启动子，
所述信号肽为选自：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)高温α-淀粉酶信号肽、枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶信号肽、枯草芽孢杆菌中温α-淀粉酶信号肽、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中温α-淀粉酶信号肽或地衣芽孢杆菌几丁质酶信号肽。
2.能够高效表达普鲁兰酶的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌的蛋白酶和中性蛋白酶缺失，并且包普鲁兰酶基因以及适于普鲁兰酶基因表达的启动子和信号肽，
其中，所述启动子为选自核苷酸序列如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16或SEQ ID NO.17所示杂合启动子；
所述信号肽为选自：地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶信号肽、枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶信号肽、枯草芽孢杆菌中温α-淀粉酶信号肽、解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶信号肽或地衣芽孢杆菌几丁质酶信号肽。
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