[发明专利]一种检测男性感染HBV后能否自然清除的试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种检测男性感染HBV后能否自然清除的试剂盒及方法，涉及生物检测领域，包括用于扩增样本中含有SNP位点的DNA的特异性引物的扩增反应液；包括用于纯化所述DNA的SAP酶的纯化反应液；用于检测TLR3基因的rs5743313位点的基因型的单碱基延伸引物的延伸反应液，当得到所述TLR3基因的rs5743313位点的检测结果表现为C/T时，则感染HBV男性不能自然清除HBV，易发展为HBV慢性携带者、慢乙肝甚至肝硬化、肝细胞癌。本发明提供的特异性引物及延伸引物灵敏度高，特异性好，本发明提供的方法可以预测男性感染HBV能否自然清除，操作简单，有利于预后目标的监测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种检测男性感染HBV后能否自然清除的试剂盒及方法。

背景技术

目前，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是世界性公共卫生问题。据世界卫生组织统计表明，全世界有4亿HBV感染者，而中国的HBV携带者就占全世界的1/3。其中，10％的成年人和约80％-90％的儿童感染后会发展为慢乙肝，而慢乙肝患者死于慢乙肝并发的肝硬化、原发性肝细胞癌的占有很大一部分，这种现象是由多因素及各种因素相互作用决定的，影响HBV感染结局的因素有病毒方面的因素，(如病毒基因型、病毒载量及病毒变异情况)；宿主免疫状态(如感染时年龄、是否有其他病毒合并感染)和宿主的遗传因素。尤其是，宿主抗病毒免疫相关基因的多态性在很大程度上决定了HBV感染后的临床结局。

TLR(toll like receptor)是模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)家族的成员，是一类古老的序列高度保守的天然免疫受体家族存在于人类的细胞表面，并且作为主要的模式识别受体，参与机体先天性免疫应答反应。TLRs在人类获得性免疫反应(T、B细胞反应)中也起到重要作用，它是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁。TLR介导特异的信号通路，形成一个复杂的、联合性的网络，特异地识别大量病原体及组织代谢产物，通过一系列的信号转导，激活固有和获得性免疫。TLRs在多种肝脏组织细胞中均有表达，人体感染肝炎病毒后,TLRs通过识别病毒双链DNA、单链RNA或非甲基化酸胞苷酰等病原相关分子模式,激活细胞内信号转导通路,活化免疫相关细胞,产生促炎因子和抗病毒的细胞因子,清除病毒的同时引发肝细胞炎症反应。目前已有13种TLRs(TLR1～TLR13)在哺乳动物中被鉴定出来,其中有11种TLRs(TLR1～TLR11)存在人体内。

TLR3、TLR9是主要的病毒核酸模式识别受体,TLR3主要识别病毒dsDNA,TLR9主要识别细菌或病毒DNA中非甲基化CpG DNA基因序列,发挥抗病毒感染作用。研究表明TLR3和TLR9的异常表达与乙型肝炎和HBV相关性肝癌有关，但TLR3和TLR9基因多态性与慢性乙型肝炎背景下的肝硬化、肝癌的遗传易感性研究尚未见报道。

发明内容

为了在感染初期提早发现，协助治疗患者，避免肝病进程加速转为严重肝病甚至肝癌，本发明提供一种检测男性感染HBV后能否自然清除的方法，该方法主要依赖于TLR3基因的rs5743313位点作为检测标准实现男性感染HBV后能否自然清除的检测。本发明方法操作简单，有利于预后目标的监测。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种男性感染HBV后能否自然清除的试剂盒，包括：

包括用于扩增样本中含有SNP位点的DNA的特异性引物的扩增反应液；

包括用于纯化所述DNA的SAP酶的纯化反应液；

用于得到TLR3基因的rs5743313位点的碱基检测结果的单碱基延伸引物的延伸反应液。

其中，当得到所述TLR3基因的rs5743313位点的检测结果表现为C/T时，则感染HBV男性不能自然清除，易发展为HBV慢性携带者、慢乙肝甚至肝硬化、肝细胞癌。

特别是，所述TLR3基因的rs5743313位点的检测包括：