[发明专利]血清外泌体miRNA生物标志物及用于胃癌早期诊断的试剂盒

说明书

本发明涉及一种血清外泌体miRNA生物标志物及用于胃癌早期诊断的试剂盒，该血清外泌体miRNA生物标志物由miR‑19b和miR‑106a组成。本发明使用血清外泌体miRNA，特别是从与胃癌发生密切相关的两个miRNA(hsa‑miR‑19b‑3p联合hsa‑miR‑106a‑5p)作为胃癌早期诊断标志物，用于诊断早期胃癌优于现有的胃镜等临床手段，具有较好的特异性和灵敏度。所述试剂盒由特异性扩增引物以及通用PCR扩增试剂组成，具有胃癌早期诊断的较好的临床应用价值，为提高胃癌早期诊断水平提供新的思路和方法。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及血清外泌体miRNA生物标志物及用于胃癌早期诊断的试剂盒。

背景技术

随着发病率和死亡率的增加，癌症已成为危害世界公众健康的主要原因。根据最新的统计数据显示，在中国，胃癌仍然是癌症死亡的第二大原因。虽然显著改善的手术技术并结合放疗和化疗，能延长早期胃癌患者的生存期，但晚期患者的预后仍然不容乐观。因此，在临床上迫切需要更加可靠和便捷的胃癌早期诊断方法。目前，胃镜检查仍是标准诊断胃癌的金标准，由于这种方法具有创伤性和局限性，并不适用于每个患者的检查。除此之外，虽然临床上也有一些非侵入性或微创性诊断标志物的应用，如癌胚抗原(CEA)和CA19-9，但其灵敏度和特异性不足以满足胃癌的早期检测。

miRNA是一种内源性的，长度约为22nt的非编码RNA，其主要通过转录后抑制或诱导信使RNA的降解来调节癌基因或抑癌基因的表达和功能。大量研究表明，miRNA在不同肿瘤中特异性表达，并且可以区分正常和肿瘤组织。此外，也有研究证实，循环miRNA可以作为各种疾病的诊断标志物，包括癌症。但循环miRNA作为诊断标志物因其很容易受受损细胞释放的miRNA的影响，具有一定的局限性。

因此，临床上急需新的无创性的有效的胃癌诊断标志物。

发明内容

针对上述胃癌早期诊断中存在的不足，本发明的目的在于提供一种血清外泌体miRNA生物标志物及用于胃癌早期诊断的试剂盒，本发明使用血清外泌体miRNA，特别是从与胃癌发生密切相关的两个miRNA(hsa-miR-19b-3p联合hsa-miR-106a-5p)作为胃癌早期诊断标志物，用于诊断早期胃癌优于现有的胃镜等临床手段，具有较好的特异性和灵敏度。所述试剂盒由特异性扩增引物以及通用PCR扩增试剂组成，具有胃癌早期诊断的较好的临床应用价值，为提高胃癌早期诊断水平提供新的思路和方法。

本发明的技术方案是：

血清外泌体miRNA生物标志物，该miRNA标志物由miR-19b和miR-106a组成。

所述miR-19b的序列如SEQ ID NO.1所示，所述miR-106a的序列如SEQ ID NO.2所示。

上述血清外泌体miRNA生物标志物作为胃癌早期联合诊断生物标志的应用。

用于人胃癌早期诊断的miRNA检测的试剂盒，包含采用上述血清外泌体miRNA生物标志物作为探针。

所述试剂盒还包括PCR扩增试剂。

所述试剂盒进行检测的具体方法为：

1.血液处理、血清外泌体分离及外泌体RNA的提取

血液被收集在血清促凝管中，然后400g离心15分钟，收集血清，储存于-80℃备用。采用血清外泌体提取试剂(SBI，EXOQ20A-1)提取血清外泌体，500ul血清加入外泌体提取试剂126ul。然后用200ul PBS重悬所分离的外泌体。采用mirVana^TM PARIS^TM Kit(Ambion，#AM1556)试剂提取血清外泌体RNA，具体操作按照试剂盒说明书进行。利用Qubit^TM 3.0荧光计测量血清外泌体RNA浓度。