[发明专利]寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒核酸检测试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，包括以下各组分：RT-PCR反应液、酶混合液、寨卡病毒/登革热病毒/基孔肯雅病毒/内标基因四重反应液、阳性对照和空白对照，其中所述的内标基因为人看家基因；

其中，所述的四重反应液包括以下4组组分：

组分（1）：由一对检测寨卡病毒的引物对和一条检测寨卡病毒探针组成，其中，所述的引物对的碱基序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；所述探针的碱基序列如SEQ IDNo.3所示，其中，SEQ ID No.3的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；

组分（2）：由一对检测登革热病毒的引物对和一条检测登革热病毒的探针组成，其中，所述的引物对的碱基序列分别为SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；所述探针的碱基序列如SEQ ID No.6所示；其中，SEQ ID No.6的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；

组分（3）：由一对检测基孔肯雅病毒的引物对和一条检测基孔肯雅病毒的探针组成，其中，所述的引物对的碱基序列分别为SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；所述探针的碱基序列为SEQ ID No.9所示；其中SEQ ID No.9的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；

组分（4）：由一对检测人看家基因的引物对和一条检测人看家基因的探针组成，其中，所述的引物对的碱基序列分别为SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示；所述探针的碱基序列为SEQ ID No.12所示；其中SEQ ID No.12的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；

组分（1）、组分（2）、组分（3）以及组分（4）选自不同的荧光报告基团。

2.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX或CY5 荧光报告基团，荧光淬灭基团选自BHQ1。

3.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：组分（1）中引物及探针之间的配比为：SEQ ID No.1所示的引物: SEQ ID No.2所示的引物: SEQ ID No.3所示的探针=400nM:400nM:200nM。

4.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：组分（2）中引物及探针之间的配比为：SEQ ID No.4所示的引物: SEQ ID No.5所示的引物: SEQ ID No.6所示的探针=400nM:400nM: 200nM。

5.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：组分（3）中引物及探针之间的配比为：SEQ ID No.7所示的引物：SEQ ID No.8所示的引物: SEQ ID No.9所示的探针= 400nM:400nM: 200nM。

6.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：组分（4）中引物及探针之间的配比为：SEQ ID No.10所示的引物：SEQ ID No.11所示的引物: SEQ ID No.12所示的探针=200nM: 200nM: 100nM。

7.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的RT-PCR反应液包括：10×PCR缓冲液、25mM Mg²⁺、10mM dNTPs。

8.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶混合液包括：RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、逆转录酶，所述DNA聚合酶是热启动酶，所述逆转录酶是M-MLV逆转录酶。

9.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述的阳性对照为灭活的寨卡病毒/登革热病毒/基孔肯雅病毒培养液，所述的空白对照为去RNA酶水。