[发明专利]一种重组牛粒细胞集落刺激因子工程菌的高密度发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，特别涉及一种牛粒细胞集落刺激因子工程菌的高密度发酵方法。

背景技术

随着分子生物学技术的迅速发展，许多有重要应用价值却又难以直接合成的蛋白质已经在多种表达系统中得到表达。在众多的基因工程表达系统中，由于大肠杆菌(Escherichia coli)结构简单、遗传学背景清晰、容易培养、生长周期短，生长条件清楚，成为最常用的宿主菌，目前已成为最为常用的原核表达系统，许多有价值的重组蛋白都在大肠杆菌中获得了表达。

利用一般的发酵工艺生产大肠杆菌或以其构建的基因工程菌的表达产物，大肠杆菌的生物量、蛋白表达量、代谢产物在菌体内和发酵液中的浓度都比较低，难以获得理想的生产效率。近年来，随着大肠杆菌基因重组技术与大肠杆菌高密度发酵技术的结合，使得原来无法获得的许多天然蛋白能够大量生产，如集落刺激因子、干扰素、氨基酸等的生产。

高细胞密度发酵(high cell density cultivation，HCDC)是指在一定条件和培养体系下，获得最多的细胞量，由此更多地或更高效地获得目的产物。即利用一定的培养技术和装置提高菌体的发酵密度，使菌体密度较普通培养有显著提高，最终提高产物的比生产率(单位体积单位时间内产物的产量)。实现高密度发酵不仅可以减少培养体积，强化下游分离提取，还可以缩短生产周期、减少设备投资，从而降低生产成本。

重组大肠杆菌进行高密度发酵可获得较高的生物量，但对发酵条件有非常高的要求。影响高密度发酵的因素非常多，如细胞生长所需要的营养物质、发酵过程中生长抑制物的积累、溶氧浓度、培养温度、诱导方式、发酵液的pH值、补料方式及发酵液流变学特性等。

因此，对于重组大肠杆菌的发酵方法存在进一步的改进和优化需求，这也是该技术领域内的研究热点和重点之一，更是本发明得以完成的动力和出发点所在。

发明内容

本发明针对现有技术的问题，提供了一种高表达量、高菌体密度的重组大肠杆菌发酵方法，并且提供了一种适用于该发酵方法的发酵培养基。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种重组牛粒细胞集落刺激因子工程菌发酵培养基，由以下组分组成：

葡萄糖8～15g/L、胰化蛋白胨15～25g/L、酵母提取物10～15g/L、 KH₂PO₄ 2～4g/L、K₂HPO₄ 5～8g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 6～8g/L、(NH₄)₂SO₄ 2～4g/L、NH₄Cl 0.1～0.3g/L、MgSO₄·7H₂O 1.0～1.5g/L、微量元素5～10ml/L 及消泡剂0.5～1ml/L，所述微量元素成分为：MnSO₄·5H₂O 0.3～0.5g/L、 ZnCl₂0.5～1g/L、CoCl₂·6H₂O 1～2g/L、Na₂MO₄·2H₂O 0.5～1g/L、CuSO₄·5H₂O 1～1.85g/L、FeSO₄·7H₂O 5～10g/L、H₃BO₃0.3～0.5g/L、CaCl₂·2H₂O 5～10g/L。