[发明专利]白介素21（IL-21）在制备抗乙型肝炎病毒药物制剂中的用途

说明书

本发明属基因工程和生物医药领域，涉及白介素21新的药用用途，具体涉及白介素21在制备抗乙型肝炎病毒制剂中的用途。本发明经实验证实，通过使用白介素21对乙型肝炎病毒慢性化感染小鼠模型进行干预，可以显著提高乙肝表面抗原（HBsAg）和乙肝e抗原（HBeAg）的转换率，同时能显著降低血清中乙型肝炎病毒DNA载量。白介素21可作为药物前体用于开发新类型抗乙型肝炎病毒药物。

技术领域

本发明属基因工程和生物医药领域，涉及白介素21（Interleukin-21，IL-21）新的药用用途，具体涉及白介素21在制备抗乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）药物制剂中的用途。

背景技术

现有技术公开了由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎以肝脏炎性病变为主，并可并发多器官损害。研究显示，HBV感染慢性化为慢性乙型肝炎（CHB）后，还能引发肝纤维化、肝硬化、原发性肝细胞癌（HCC）和肝衰竭，最终导致死亡。据统计显示，随着HBV疫苗的成熟和预防接种的推广，新发HBV感染率显著下降，但全球仍然有3.5亿左右HBV慢性携带者，每年约1百万患者死于HBV感染相关疾病（Lavanchy 2004）；中国属HBV感染高发区，约有1.2亿慢性携带者和3000万慢性乙型肝炎患者（Liu et al.2002）。研究显示，HBV易感宿主仅限于人及黑猩猩。由于动物伦理、经济成本等条件的限制，目前尚无常规实验动物模型能够有效模拟HBV感染、致病等过程。

Yang PL 等的工作（Yang PL et al. 2002）表明，将具有启动病毒转录复制能力的乙肝病毒1.3倍基因组（1.3 mer）插入质粒载体后，利用尾静脉高压水动力注射方法注射入免疫健全小鼠体内可建立HBV急性复制表达小鼠模型；上述模型由于小鼠血清中病毒抗原在注射后10天左右全部转阴，难以用于研究慢性乙型肝炎的形成机制，病毒被快速清除也使得该模型不适合进行抗HBV药物的研发。有研究使用免疫缺陷的小鼠（Yang PL et al.2002）或在质粒载体中引入腺相关病毒序列（Huang LR et al. 2012），能实现HBV在小鼠肝脏的持续性转录复制，然而由于对宿主免疫缺陷或HBV以外病毒序列的严格依赖，此种HBV持续模型同样不适合用于研究慢性乙型肝炎的形成机制或抗HBV药物的研发。

本申请前期的工作开发了一种HBV慢性化小鼠模型和建立该模型所使用的HBV毒株与方法。该HBV毒株为临床分离株（GenBank No. AF100309.1），其1.3拷贝基因组（核苷酸,nucleotide，nt955-3215/1-1950）克隆入通用质粒载体pUC18后命名为BPS；通过尾静脉高压水动力注射法将BPS注射于BALB/c或C57BL/6小鼠后，血清中能够持续检测到HBV的3个主要指标：表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核酸（HBV DNA），且上述指标持续阳性时间可达33周，注射后33周时阳性率可达50%。该模型可用于HBV持续性感染机制的研究，并为抗HBV药物筛选及评估提供重要的动物模型。（专利申请号：CN201610616043.1）

白介素21（Interleukin 21, IL-21）首先由Parrish-Novak报道（Parrish-Novak2000），其主要由激活的CD4+细胞表达和分泌，IL-21的受体IL-21R分布于免疫细胞和非免疫细胞，当IL-21与受体结合后，通过Jak/STAT 通路激活靶基因（Habib T 2002）。IL-21能诱导靶细胞的分化和增值；也能够调控免疫细胞如自然杀伤细胞和细胞毒T细胞，从而破坏感染的细胞（Johnson LD 2009）或肿瘤细胞。IL-21在维持具有功能的CD8+ T细胞免疫中具有重要作用。在慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（ lymphocytic choriomeningitisvirus ，LCMV）感染小鼠实验中，发现IL-21信号通路对于维持效应CD8+ T功能是必须的，同时在IL-21基因缺陷小鼠中，CD8+ T细胞数目显著下调 （Yi J S 2009，Frohlich A 2009）。在通过抗病毒治疗慢性乙肝患者过程中，血清中高含量的IL-21可以作为HBeAg血清型转换的指标（Ma S W 2012）。