[发明专利]抗人C-反应蛋白抗体及其应用

说明书

本申请涉及抗人C‑反应蛋白(CRP)抗体及其制备方法以及上述抗体在人C‑反应蛋白检测中的应用。本申请发明人制备了多种抗体，并进行配对筛选，获得灵敏度及特异性均能满足需求的抗体组合(P20及P02)；同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。对上述抗体组合进行检测体系的调试优化工作，获得操作简便，灵敏度，特异性及相关检测性能均可满足人临床样本检测的人C‑反应蛋白的胶体金免疫层析定量检测卡。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及两种抗人C-反应蛋白(CRP)抗体及其制备方法以及上述抗体在人C-反应蛋白检测中的应用。

背景技术

C-反应蛋白(C reactive protein，CRP)是蛋白质家族中的一员，是一种急性期反应蛋白，在组织损伤和细菌感染时血浆浓度急剧升高，是机体重要的防御分子，主要由肝脏产生并分泌。CRP由五个完全相同的球形单体以非共价键结合组成稳定的盘状结构，属于正五聚体家族。CRP在结构上为对称的五面体，其单体由206个氨基酸组成，分子量约为23KDa，CRP的总分子量约为118KDa。CRP参与体内的各种炎症及免疫反应，是冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的重要标志物。大量研究表明：高水平的CRP是周围性血管病、心肌梗死、脑血管病及血管性死亡的独立风险预测因子。

在正常人血清中CRP含量极少，浓度为0.062-8.2mg/L，半衰期约为15小时。当发生细菌感染2小时后即开始升高，平均8小时增加1倍，48小时达高峰，其在病毒感染时则不会升高。CRP持续升高则提示机体存在慢性炎症或自身免疫性疾病。CRP变化不受病人的个体差异、机体状态及治疗药物的影响。另外，CRP在其他领域亦发挥着重要的作用：①在由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素中CRP的作用已被证实，及时监测CRP的水平变化对心血管疾病的干预及预后起重要作用。有些学者甚至认为CRP可作为心血管危险评估的金标准，且CRP水平越高，发生心脑血管的危险性就越大；②CRP可用来评价急性胰腺炎的严重程度，当发生广泛坏死性胰腺炎时血清中CRP的水平可高达250mg/L；③如将CRP与甲胎蛋白联合应用，可用来鉴别肝脏恶性肿瘤与良性疾病，为临床治疗方案制定提供指导；另外，CRP测定对肿瘤的治疗和预后亦有积极的意义，恶性肿瘤患者CRP水平大都升高，手术切除肿瘤后CRP水平则会下降，且进行放疗、化疗和皮质激素治疗对血清CRP的影响非常小，所以测定血清CRP的水平变化有助于临床估测各个器官系统中恶性肿瘤的进展过程。④评估患者预后：CRP水平越高，提示疾病控制不佳，预后不良。

鉴于CRP在众多领域中的重要作用，制备CRP抗体并用于制备CRP定量检测试剂盒具有重要的临床应用价值。CRP通常是通过抗体浊度法或免疫比浊法测定的，而他们的检测能力在3-5mg/L以上，这个水平仅仅适用于对感染的预测，而对于冠脉及脑血管的危险预测是远远不够的。除上述技术以外，使用胶体金和荧光定量检测技术的CRP试纸卡，可满足快速检测及床旁检测的需求。其中基于胶体金定量层析技术的全程CRP检测方法既具有全自动生化仪免疫透射比浊法试剂的准确性，同时检测更加简便、快速，适合床旁诊断，易于在门诊、急诊或者ICU病房内开展。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供能有效的、特异性结合人C-反应蛋白的抗体。更具体地说：

本发明的第一目的在于提供两种抗人C-反应蛋白抗体。

第一种抗人C-反应蛋白抗体(P20)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。