[发明专利]一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法

说明书

技术领域 本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法，属生物技术领域。

背景技术 拔地拉(Badila)，又称黑皮蔗，是一种热带型水果甘蔗，清甜可口，营养价值高，在我国种植历史悠久，在广西已有50多年的栽培历史，也是面积最大的水果甘蔗，其中广西种植面积占总面积的90％以上。

由于拔地拉种植年限太久，种性退化，已普遍感染了花叶病(sugarcane mosaic virus,SCMV)和宿根矮化病(ratoon stunting disease,RSD)等病毒性病害，致使甘蔗植株矮化、节间变短、品质变劣，商品食用价值下降，并且产量受到严重影响。研究表明，茎尖分生培养对甘蔗花叶病、宿根矮化病等病毒病的脱毒是有效的。利用优良拔地拉的茎尖生长点及心叶进行组织培养，既可快速繁殖优质高产的拔地拉良种，又能减轻病毒感染。利用组织培养技术，生产健康果蔗组培苗是解决种质退化问题行之有效的途径。

拔地拉脱毒种苗组培快繁的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的拔地拉脱毒种苗组培快繁方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中，进行无菌培养才能正常生长，设备要求高且耗能大，人工操作成本高。如果能通过抑菌的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌的情况下，仍能使拔地拉脱毒组培苗正常生长，那样，一方面既可以降低拔地拉组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，减少了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对拔地拉生长产生毒害或抑制，即不影响拔地拉的正常生长，从而从根本上简化了拔地拉组织培养。

发明内容 本发明的目的是提供一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：诱导培养基为MS+2.0～5.0mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L KT+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+2.0～5.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌呤；所述NAA，指α-萘乙酸；所述KT，指6-糠氨基嘌呤；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；

3.无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；