[发明专利]一种用于阿胶真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种鉴定阿胶真伪的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)对照品溶液的制备：

对照品检测基质粉碎后，称取一定量的对照品检测基质于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，得到基质溶液，用配制得到的基质溶液溶解称量好的多肽I、多肽II和多肽III，摇匀，得到对照品母液，采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，将对照品母液稀释500-10⁵倍，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Thr-Gly-Pro-Val-Gly-Lys，多肽II的氨基酸序列为His-Gly-His-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Pro-Gln-Gly-Ala-Arg，对照品检测基质为鱼皮胶；

2)待检测样品溶液的制备：

取待测纯品胶样品于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液溶解，微孔滤膜过滤，续滤液加胰蛋白酶酶解；

3)将对照品溶液、待检测样品溶液分别放入液质联用仪，选择m/z469.5→457.3、655.4，m/z253.8→312.2，369.2，m/z421.0→684.4、528.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z469.5→457.3、m/z253.8→312.2、m/z421.0→684.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M₁、多肽II的含量记为M₂、多肽III的含量记为M₃；

4)按下式计算出阿胶样品中阿胶的含量：

阿胶中驴皮源成分的含量％＝(M₁/937.1–M₂/505.5)×840/M₃×100％。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NH₄HCO₃溶液为1％w/wpH8.0的NH₄HCO₃溶液。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对照品溶液的制备包括以下步骤：

1)基质溶液的制备：对照品检测基质粉碎后，称取0.50g的对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀；

2)称取0.05g对照品检测基质于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，分别加入18.3mg的多肽I、9.9mg的多肽II和16.4mg的多肽III，用1％w/wpH8.0的NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀；

3)对照品溶液的制备：采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，分别将对照品母液稀释500-10⁵倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的待检测样品溶液的制备包括以下步骤：取0.05g待测纯品胶样品于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中液质联用仪检测的液相条件为：C₁₈反相色谱柱，流动相A为含有0.1％v/v甲酸的水溶液，流动相B为含有0.1％v/v甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→20min，流动相A 100％→25％，流动相B 0％→75％；质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI⁺)进行多反应监测。