[发明专利]一种制备鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法

说明书

八角莲是鬼臼毒素类抗癌药物的重要资源。除鬼臼毒素类化合物外，黄酮和双黄酮类化合物也是八角莲药用资源中的重要抗氧化和抗癌物质。但如何高纯度地制备和纯化这些物质，仍是一种重要的挑战。本发明提供一种新的低成本的环境友好的高产率的制备高纯度鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法，包括溶剂提取和粗分等步骤，其特征在于所用分配体系中含有用来调节分配系数的糖。该方法经济实用，便于大规模应用。并且由于糖具甜味和无毒，因此该方法不仅可以得到高纯度的臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物单体，而且可以不经除糖得到这些单体的糖制剂。

技术领域

本发明涉及天然药物的制备方法，具体的说是涉及黄酮类化合物(英文名Flavones)和鬼臼毒素类化合物(英文名Podophyl lotoxins)的分离制备方法。

背景技术

八角莲是鬼臼毒素类抗癌药物的重要资源。除鬼臼毒素类化合物外，黄酮和双黄酮类化合物也是八角莲药用资源中的重要抗氧化和抗癌物质。但如何高纯度地制备和纯化这些物质，仍是一种重要的挑战。逆流色谱是一种重要的方法，但如何选择合适的溶剂体系仍是一个耗时的工作。

发明内容

本发明的目的是针对当前鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物分离制备中的困难提供一种制备鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法，该方法成本低、环境友好且产率高、产物纯度高。

本发明的制备鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法，包括溶剂提取、粗分和逆流色谱分离步骤，所述的逆流色谱分离步骤中采用含有糖溶液的两相溶剂作为逆流色谱溶剂，其中所述的糖用于调节分配系数K。

所述的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、木糖中的一种或多种组合。

所述的糖溶液为糖的水溶液，质量分数是5-30％。在所述的两相分配体系中糖浓度可以是恒定的，也可以是梯度变化的；糖的梯度变化可以是线性梯度的，也可以是台阶式梯度。

所述的含有糖溶液的两相溶剂为正己烷－乙酸乙酯－甲醇－糖的水溶液。

所述的含有糖溶液的两相溶剂为正己烷－乙酸乙酯－乙醇－糖的水溶液。

一种制备鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法，具体包括如下步骤：

(1)将八角莲提取液进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液，得到八角莲粗品；

(2)将糖溶解到水中配制形成糖溶液；

(3)将(1)中所得到的八角莲粗品用正己烷、乙酸乙酯、甲醇/乙醇、糖溶液四元形成的两相体系进行逆流色谱分离，得到含糖的黄酮类化合物和鬼臼类化合物纯品；

(4)除去逆流色谱馏分—黄酮类化合物和鬼臼类化合物中的糖类，获得产物。

上述技术方案中，所述的步骤2)中糖溶液质量分数为5％-30％。

步骤3)中所述的两相体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇/乙醇、糖溶液四元的体积比为：4:6:4:6或4.5:5.5:4.5:5.5或5:5:5:5。

步骤(4)中脱糖的过程中，极性小的部分可以直接用乙酸乙酯干萃取，极性大的部分依次用水和甲醇分别洗脱反相C18分离柱上的化合物。

本发明的有益效果在于：

(1)糖是一种甜的、短链、可溶性的碳水化合物。作为添加剂，和盐析制备化合物的策略相比，糖析制备的策略更绿色更环保，不会产生盐腐蚀等并发症。

(2)本发明中添加糖到正己烷、乙酸乙酯、甲醇/乙醇、水的两相体系，可以改变溶剂以及化合物在两相体系中的分配，从而可以快速有效地找到合适的溶剂体系。