[发明专利]一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法

权利要求书

1.一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、分化及增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

(2)培养基配制：诱导培养基为MS+1～5mg/L 2,4-D+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；分化及增殖培养基为：MS+0.5～2mg/L IAA+0.5～2mg/L KT+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+2～5mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述2,4-D，指2,4-二氯苯氧乙酸；所述IAA，指吲哚乙酸；所述KT，指6-糠氨基嘌呤；所述NAA，指α-萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固，备用；

(3)无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；

(4)诱导培养：取田间生长健壮且无病虫害的割手密无性系顶端部分，用体积比为75％的乙醇表面消毒，剥离外层叶鞘，取白色心叶的肥厚带中生长点以上6cm内的幼嫩心叶，将其切成不超过3mm厚度的圆片，接种于诱导培养基上，培养30d后诱导出愈伤组织；培养室温度为26℃，暗培养；

(5)分化及增殖培养：将诱导出的割手密愈伤组织转入分化培养基中，30d后逐步诱导出幼芽；将幼芽接种到增殖培养基上，逐步发育成丛生苗，每15d转接一次，大量增殖；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1600Lx；

(6)生根培养：取高度为3～5cm苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1800Lx；

(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至透水性好的基质中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃，所述透水性好的基质，如草木灰:沙子:耕作土＝1:1:1。

2.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，其特征在于所述诱导培养基为：MS+3mg/L 2,4-D+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+30mg/L丙酸钙+0.1mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。

3.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，其特征在于所述分化及增殖培养基为：MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L KT+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+30mg/L丙酸钙+0.1mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。

4.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，其特征在于所述生根培养基为：1/2MS+4mg/L NAA+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+30mg/L丙酸钙+0.1mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。