[发明专利]一种mRNA分子在植物砧穗间传递的荧光鉴定方法有效
| 申请号： | 201710040058.2 | 申请日： | 2017-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN108330182B | 公开（公告）日： | 2020-04-10 |
| 发明（设计）人： | 李天忠;郝理;王胜男;王圣元;陈佳琪 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848;C12N15/82;C12N15/65 |
| 代理公司： | 北京卫平智业专利代理事务所(普通合伙) 11392 | 代理人： | 张新利 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mrna 分子 植物 砧穗间 传递 荧光 鉴定 方法 | ||
1.一种mRNA分子在植物砧穗间传递的荧光鉴定方法，其特征在于，构建基因携带荧光蛋白标签的载体，制备转基因植物；以转基因植物为砧木，将其和野生型接穗在无菌条件下进行微嫁接，观察砧木和接穗的荧光出现情况，若砧木和接穗不定根均观察到荧光，则说明所述基因的mRNA分子在植物砧穗间传递。
2.一种mRNA分子在植物砧穗间传递的荧光鉴定方法，其特征在于，构建基因携带荧光蛋白标签的载体，制备转基因植物；以转基因植物为砧木，将其和野生型接穗在无菌条件下进行微嫁接，采用巢氏PCR检测，若砧穗巢氏PCR产物均出现特异性条带，则说明所述基因的mRNA分子在植物砧穗间传递。
3.如权利要求1或2所述的荧光鉴定方法，其特征在于，所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、橙色荧光蛋白或蓝绿荧光蛋白。
4.如权利要求1或2所述的荧光鉴定方法，其特征在于，所述基因为杜梨HMGR1。
5.如权利要求4所述的荧光鉴定方法，其特征在于，所述载体为过表达GFP-PbHMGR1载体，其通过以下方法制备得到：提取杜梨基因组RNA，反转录为cDNA，进行PCR扩增，回收目的片段并纯化，连接T载体，转化感受态细胞，选择测序正确的阳性克隆即得，所述PCR扩增所用的引物对的序列如SEQ ID NO.2-3所示。
6.如权利要求5所述的荧光鉴定方法，其特征在于，所述巢氏PCR，第一轮PCR反应采用的引物对序列如SEQ ID NO.4-5所示，第二轮PCR反应采用的引物对序列如SEQ ID NO.6-7所示。
7.一种HMGR1mRNA分子在植物砧穗间传递的荧光鉴定方法，包括如下步骤：
(1)分别提取杜梨总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增HMGR1基因的全长；
(2)构建杜梨HMGR1基因携带荧光蛋白标签的载体，制备转基因植物；
(3)转基因植物为砧木，将其和野生型接穗在无菌条件下进行微嫁接，观察砧木和接穗的荧光出现情况，若砧木和接穗不定根均观察到荧光，则说明杜梨HMGR1基因的mRNA分子在植物砧穗间传递。
8.一种HMGR1mRNA分子在植物砧穗间传递的荧光鉴定方法，包括如下步骤：
(1)分别提取杜梨总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增HMGR1基因的全长；
(2)构建杜梨HMGR1基因携带荧光蛋白标签的载体，制备转基因植物；
(3)转基因植物为砧木，将其和野生型接穗在无菌条件下进行微嫁接，采用巢氏PCR检测，若砧穗巢氏PCR产物均出现长度为1084bp的特异性条带，则说明HMGR1基因mRNA分子在植物砧穗间传递。
9.权利要求1-8任一所述的荧光鉴定方法在植物种质资源改良中的应用。
10.权利要求1-8任一所述的荧光鉴定方法在鉴定可在植物砧穗间远距离传递mRNA分子的基因中的应用。
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