[发明专利]一种灵芝担孢子萌发的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌育种领域，具体的说涉及一种灵芝担孢子萌发的方法。

背景技术

灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.]隶属担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、多孔菌科、灵芝属。《神农本草经》和《本草纲目》将其列为上品，有“益心气，补中，增智慧，不忘”、“久服轻身不老，延年神仙”，在民间有悠久的应用历史。现代药理学研究也表明灵芝具有多种功效：1.抗肿瘤作用；2.免疫调节作用；3.抗放射作用；4.对神经系统作用；5.对心血管作用；6.对呼吸系统的作用；7.对消化系统的作用。灵芝的交配型为四极性异宗结合，即两个不同的细胞核共存于一个细胞的菌丝才能进行生殖生长而形成子实体。目前，灵芝常用的育种手段主要有杂交、原生质体融合以及诱变等。近来的研究表明目前生产上使用的灵芝菌株间的遗传多样性不高，而以此为亲本材料通过杂交或诱变或原生质体融合等手段获得的杂交菌株或诱变菌株或融合菌株中出现超亲现象的概率很低，因而严重影响了育种效率的提高和高产优质灵芝新品种的获得。而灵芝品种作为灵芝产业的源头和重要要素，在很大程度上影响着灵芝产业的发展。

灵芝担孢子是灵芝生长发育后期通过减数分裂产生的单核生殖细胞，因而具有丰富的遗传多样性，从而为灵芝新品种的选育提供了绝好的材料。但是没有萌发的灵芝担孢子是无法生成初级菌丝的，因而无法通过杂交、原生质体融合或诱变等手段进行灵芝品种选育。灵芝孢子具有两层壁，十分坚韧，一般的化学、物理方法很难将其打破；在自然界中非常难以萌发，在实验室条件下萌发率也极低。从而限制了灵芝的新品种选育。

虽然利用原生质体单核化技术可以解决因灵芝担孢子萌发率极低，单核菌株不易获得而出现的难题，但通过原生质体单核化技术获得的单核菌株，因没有发生减数分裂，造成获得的单核菌株的遗传多样性不丰富。因此通过原生质体单核化技术难以获得广泛变异的新菌株。

为了解决灵芝育种尤其是实验室育种的问题，需要开发一种新的担孢子萌发的方法。

发明内容

本发明首先提到了一种灵芝担孢子萌发培养基，该培养基由如下组分组成：

灵芝煮出液，PDA粉末和水；

其中灵芝煮出液、PDA粉末和水的比例为：300～400mL：39g：600～700mL；

其中所述的灵芝煮出液是通过如下方法制备得到的：

将灵芝子实体加入水中，电磁炉800～1600w加热15～20min，过滤，取滤液即可。

具体的灵芝煮出液是通过如下方法制备得到的：

取灵芝子实体15～20g，加入300～400mL蒸馏水，电磁炉800～1600w加热10～15min，过滤，取滤液，并加水定容至300～400mL，得到灵芝煮出液。

本发明还提供了应用上述灵芝担孢子萌发培养基进行灵芝担孢子萌发的方法，该方法为：

取灵芝担孢子，用水稀释，形成担孢子悬浮液，使担孢子的浓度为×10³个/mL；

吸取担孢子悬浮液均匀涂布于上述灵芝担孢子萌发培养基上；

于25～28℃避光培养至担孢子萌发。

本发明还提供了一种灵芝担孢子收集与萌发的方法，该方法包括如下步骤：

⑴适合担孢子收集的灵芝子实体选择

选取生长发育良好、菌盖美观且正在喷射灵芝担孢子的灵芝子实体(正生长于菌棒上)；

⑵担孢子收集

担孢子收集采用套筒方式，用两头开口的保鲜袋套住灵芝子实体，再用一端封闭的无纺布圆筒套在外部；

担孢子收集期间的环境温度维持在20～30℃；收集时间为3～5d，取灵芝菌盖上方的担孢子；

⑶担孢子保存

收集的灵芝担孢子存放于无菌的离心管中，并置于4～10℃，待用；

⑷担孢子萌发

取灵芝担孢子，用水稀释，形成担孢子悬浮液，使担孢子的浓度为×10³个/mL；

吸取担孢子悬浮液均匀涂布于上述灵芝担孢子萌发培养基上；

于25～28℃避光培养至担孢子萌发。

本发明所提供的将采用套筒方式收集的灵芝担孢子在灵芝担孢子萌发培养基上进行萌发，灵芝担孢子的萌发率在10％以上，甚至高达20％，从而获得灵芝孢子的单核菌株。本方法解决了在实验室条件下灵芝担孢子萌发率极低的难题，从而为未来的灵芝单孢杂交育种奠定了技术基础。