[发明专利]一种高活性木瓜蛋白酶的制备工艺

权利要求书

1.一种高活性木瓜蛋白酶，其特征在于：所述木瓜蛋白酶为木瓜蛋白酶的粗制产品，为浅黄色粉末，水溶性良好，酶活达到1.55万U/g。

2.制备权利要求1所述一种高活性木瓜蛋白酶的方法，其特征在于具体操作步骤如下：

（1）制备宣木瓜浆

将新鲜宣木瓜洗净，去皮、去仔，分割成小块，按质量比1：1加入蒸馏水，榨汁打浆，得到宣木瓜浆；

（2）制备宣木瓜汁

在宣木瓜浆中加入复合酶，搅拌均匀，在温度40～50℃条件下酶解反应1.5～2h，得到酶解宣木瓜汁；所述复合酶由纤维素酶和果胶酶组成，复合酶的加入量为宣木瓜浆质量的0.6～1.2%；

（3）抽滤

将酶解宣木瓜汁抽滤去除滤渣，得新鲜宣木瓜汁；

（4）离心分离

将新鲜宣木瓜汁离心分离，取上清液，温度1～4℃条件下冷藏备用；

（5）制备复合溶液

在上清液中加入浓度75%的乙醇和复合保护剂，用浓度0.1mol/L的氢氧化钠（NaOH）调节pH值为6.0-8.0，静置10～12h，得到复合溶液；

所述复合保护剂由半胱氨酸（L-cys）和乙二胺四乙酸（EDTA）组成；

（6）制备木瓜蛋白酶

将复合溶液离心取沉淀，冷冻干燥至恒重，得到木瓜蛋白酶。

3.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，榨汁时间为3min。

4.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，纤维素酶的酶活为5万U/g，果胶酶的酶活为10万U/g；复合酶中纤维素酶：果胶酶的质量比为8:1。

5.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，抽滤过120目双层滤布。

6.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，离心分离的转速为3500rpm，时间为15min。

7.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，按1：1的体积比在上清液中加入浓度75%的乙醇；半胱氨酸（L-cys）的添加量为0.06mol/L，乙二胺四乙酸（EDTA）的添加量为0.004mol/L。

8.根据权利要求2所述一种高活性木瓜蛋白酶的制备方法，其特征在于：步骤（6）中，离心分离的转速为5500rpm，时间为10～15min；冷冻干燥温度为﹣40℃。