[发明专利]一种制备结直肠癌抗原特异性T细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫细胞领域，更具体地涉及一种制备结直肠癌抗原特异性T细胞的方法，以及由所述方法获得的结直肠癌抗原特异性T细胞。

背景技术

结直肠癌是全球第三大最常见癌症，每年有100万左右的新增病例和超过50万人死于该病。结直肠癌的治疗以手术为主，并结合辅助放疗、化疗，虽然辅助放化疗能在一定程度上延长患者的生存期，但也伴随严重的副反应，且即使经过积极的联合治疗，该病依然存在很高的复发转移率。目前迫切需要开发出能有效延长患者生存期，减少复发和转移风险的治疗策略。

转化生长因子βII型受体(TGFβRII)和O位N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶(OGT)基因的框移突变产生一种具有人白细胞抗原A2(HLA-A2)限制性的新生抗原，存在于20-40％HLA-A2限制性结肠癌患者并且不存在于正常人和其他肿瘤中，提呈后的抗原肽为SLYKFSPFPL和RLSSCVPVA。

越来越多的证据表明免疫系统可以预防肿瘤生长和转移扩散。包括细胞因子、肿瘤疫苗、免疫效应细胞，以及基因改造T细胞受体、单克隆抗体等成为国内外免疫治疗研发的热点。目前已开展多项结肠癌免疫治疗临床试验研究，包括促进免疫系统的细胞因子、免疫检查点阻断、抗原疫苗和过继性细胞治疗等。尽管目前基因改造细胞成为免疫治疗中翘楚，但由于制备工艺复杂，并存在脱靶效应，使得其在治疗实体瘤的临床阶段推进受到阻碍。

以往针对细胞因子诱导杀伤性细胞，自然杀伤细胞治疗包括结肠癌在内的实体瘤的研究认为这些治疗方法存在一定的疗效，但由于缺乏抗原特异性文献报道临床治疗效果参差不齐。

肿瘤细胞表面的抗原通过抗原提呈细胞(APC)加工成抗原肽与主要组织相容复合物(MHC)分子形成复合物提呈并参与活化给T细胞，形成肿瘤抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。肿瘤为了逃避识别，下调甚至不表达MHC分子，部分肿瘤患者免疫细胞数量下降功能低下都会造成肿瘤抗原无法提呈，导致T细胞无法活化。所以使用抗原呈递细胞辅助形成杀伤性T细胞是常用的方法，但是这些方法不稳定且不够方便。

综上所述，尚需要更加有效简单的免疫疗法和抗原特异性T细胞更加简单和高效的制备方法。

发明内容

为了解决现有技术面临的问题，本发明人开发了一种制备抗原特异性T细胞，特别是结直肠癌抗原特异性T细胞的方法，其解决或部分解决了以上问题。

本发明的一个方面涉及抗原特异性T细胞的制备方法，其包括使T细胞与肿瘤特异性抗原共孵育。

进一步地，所述方法中的肿瘤特异性抗原可以为结直肠癌特异性抗原。

在一些实施方案中，所述结直肠癌特异性抗原为肽RLSSCVPVA。

在一些实施方案中，本发明方法中的T细胞在混悬液中，进一步地，所述混悬液可以为外周血单核细胞混悬液或者外周血。

在一些实施方案中，本发明方法中的T细胞为CD8+T细胞。

本发明的一个方面涉及由本发明方法获得的抗原特异性T细胞，特别是结直肠癌抗原特异性T细胞。

本发明还涉及由本发明方法获得的结直肠癌抗原特异性T细胞在制备用于治疗结直肠癌的制剂中的用途。

本发明中使用的肽SLYKFSPFPL(下文可简称为“抗原肽1”、“1号肽”或“P1”)和肽RLSSCVPVA(下文可简称为“抗原肽2”、“2号肽”或“P2”)可以是化学合成的或者经生物工程技术产生的，其具有较高的，例如大于99％的纯度，具有良好的均质性。直接使用肽SLYKFSPFPLA，或者肽SLYKFSPFPL和肽RLSSCVPVA的混合物处理PMBC获得抗原特异性T细胞的方法，步骤大为简化，可重复性好，具有良好的可操作性和实用价值。

附图说明

图1示出制备的肽的纯度；图1A抗原肽RLSSCVPVA合成质谱分析的离子峰，在12.245’出现；图1B抗原肽RLSSCVPVA合成质谱分析的主要碎片峰仅有一个，该碎片分子量为931.76，丰度为100％，接近RLSSCVPVA的理论分子量。图1C抗原肽SLYKFSPFPL合成质谱分析的两个离子峰，分别出现在16.731’和21.317’。图1D OGT抗原肽SLYKFSPFPL合成质谱分析的主要碎片峰，有两个，碎片的分子量(丰度)分别为1198.70(99％)和1220.81(1％)，第一个碎片的分子量接近SLYKFSPFPL的理论分子量。