[发明专利]表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用

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技术领域

本发明涉及一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用。动物生物制品学领域，

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鸡马立克氏病(Marek’s disease,MD)，是由鸡马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的一种鸡马立克氏病(Marek`s Disease，MD)是由鸡疱疹病毒引起鸡的一种最常见的淋巴细胞增生性疾病，以外周神经、虹膜、皮肤、肌肉和各内脏器官的淋巴样细胞浸润、增生和肿瘤形成为特征。

本病早在1907年由匈牙利的兽医病理学家马立克首先发现，并在1961年命名为马立克氏病。现在世界各主要养鸡国家和地区均有流行，在我国也是经济意义上最重要的禽病之一，对我国养鸡生产造成严重威胁和巨大的经济损失。

马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)属于细胞结合性疱疹病毒B群。病毒有两种存在形式，即裸体粒子(核衣壳)和有囊膜的完整病毒粒子。前者病毒核衣壳呈六角形，直径为85～100nm，有严格的细胞结合性，离开细胞致病性即显著下降和丧失，在外界环境中生存活力很低，主要见于肾小管、法氏囊、神经组织和肿瘤组织中。大多数裸体病毒粒子存在于细胞核中，偶见于细胞浆或细胞外液中。后者主要存在于细胞核膜附近或者核空泡中，直径130～170nm，主要见于羽毛囊角化层中，多数是有囊膜的完整病毒粒子，非细胞结合性，可脱离细胞而存在，对外界环境抵抗力强，在本病的传播方面起重要作用。

1975年Bulow和Biggs采用间接免疫荧光试验、琼脂凝胶免疫沉淀反应及病毒中和试验，把MDV和相关病毒(HVT)分为三种血清型，随后这种分类方法由Lee所建立的MDV型特异性单克隆抗体所证实。

根据MDV的三种血清型，目前商品化MDV疫苗分为致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株、无致病性的Ⅱ型SB1株和Ⅲ型火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey，HVT)FC126株。致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株对MD保护效果好，但其作为严格的细胞结合型病毒，必须液氮保存运输，极大的增加了疫苗成本。HVT可以冻干保存，节约了疫苗成本，但其对MD的保护力较弱，因此提高HVT的免疫效力十分必要。Ross将血清Ⅰ型MDV的GB基因插入到HVT基因组的TK基因，但构建的重组病毒在体内的增殖能力变弱。(Ross LJ,Binns MM,Tyers P,Pastorek J,Zelnik V,Scott S:Construction and properties of a turkey herpesvirus recombinant expressing the Marek's disease virus homologue of glycoprotein B of herpes simplex virus.The Journal of general virology 1993,74(Pt3):371-377.)，而疫苗毒的增殖能力又和保护力紧密相关(Gimeno IM,Witter RL,Hunt HD,Reddy SM,Reed WM:Biocharacteristics shared by highly protective vaccines against Marek's disease.Avian Pathol2004,33(1):59-68.)。因此，构建正常增殖且具有更高保护力的HVT非常有必要。

疫苗是防制畜禽疾病的重要手段之一，目前大多重要的家禽传染病都可用相应的疫苗作有效的预防。为了进一步降低生产成本，提高产品质量，禽用新型疫苗的研究迫在眉睫。随着分子生物学技术的日臻完善，以改造病毒核酸结构为手段的疫苗，如基因缺失株疫苗、插入突变株、病毒活载体疫苗等得到了极大的发展，其中病毒活载体疫苗以生产使用方便，价格低廉，且安全性、稳定性及免疫力较强等方面优势，成为研究的热点。相对于其它病毒载体(如禽痘病毒、禽腺病毒、新城疫病毒等)，鸡马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)作为最有潜力的疫苗载体，其突出的优点体现在：MDV是严格的细胞结合型病毒，构建的载体疫苗不受母源抗体的干扰，克服了众多活病毒载体疫苗的缺陷；MDV分子大小为180kb左右，能够容纳较大片段基因的插入，而不影响重组病毒的稳定性；MDV疫苗适合早期免疫，对多数病毒特别是免疫抑制性病毒疫苗的研发带来了曙光。基于HVT构建病毒活载体疫苗不仅具有上述优点，还可以实现一苗两防、一苗多防，具有广阔的市场前景。

发明内容