[发明专利]一种培育带血管蒂骨瓣的方法

权利要求书

1.一种培育带血管蒂骨瓣的方法，利用含轴心血管的血管化包膜瓣，在体外，接受免疫缺陷动物或人工灌流系统的血液灌注，作为血管化骨瓣的培育器；原代培养患者骨髓间充干细胞或成骨细胞，接种至多孔骨基质材料上，包裹于血管化骨瓣的培育器内，进行血管化骨瓣的培育。

2.根据权利要求1所述的一种培育带血管蒂骨瓣的方法，其特征在于，所述的血管化骨瓣的培育器的构建：

贴着包膜的血管束与包膜内新生小血管相连通，作为包膜的轴心血管，将移出体外的轴心血管两旁的血管化包膜，包膜瓣的轴心血管与体外人工灌流系统的管道或免疫缺陷动物的股动静脉显微吻合，接受血液灌注，轴型包膜瓣遂成为血管化骨瓣的培育器。

3.根据权利要求2所述的一种培育带血管蒂骨瓣的方法，其特征在于，包膜瓣接受人工灌流系统的血液灌注，成为血管化骨瓣的培育器，体外人工灌流系统包括：由管道连接的置换液容器、废液收集容器、血浆泵和血液分离器，轴型包膜瓣平铺在包膜血管床上，包膜瓣的轴心血管的动静脉断端分别与人工灌流系统的管道连通，置换液经血浆泵一泵入血液分离器的血浆槽内，血浆槽内的合格血浆进入轴型包膜瓣，循环出的血浆被血浆泵二泵入血液分离器进行分离，将轴型包膜瓣的代谢产物经血浆泵三泵入至废液收集容器内，分离出的合格血浆调节压力P_V、pH值后与置换液容器内的置换液在血浆槽内混合后重新灌入轴型包膜瓣，形成血浆的体外人工灌流系统。

4.根据权利要求1所述的一种培育带血管蒂骨瓣的方法，其特征在于，所述的原代培养患者骨髓间充干细胞或成骨细胞通过体外扩增培养：

骨髓穿刺针抽取数毫升患者骨髓，密度梯度离心法收集单个核细胞层，低糖DMEM培养基重悬细胞沉淀并接种培养BMSC，或继以成骨细胞诱导液培养，获得OBC，将体外扩增培养的BMSC或OBC均匀接种至市售的多孔骨基质材料上。

5.根据权利要求1或4所述的一种培育带血管蒂骨瓣的方法，其特征在于，接种有细胞的多孔骨基质材料作为骨支架转移至血管化骨瓣培育器内：包裹于血管化骨瓣的培育器内，进行血管化骨瓣的培育，获得带血管蒂骨瓣：成骨性细胞在骨基质材料的诱导下，不断增殖与分化，形成骨细胞与骨基质，同时包膜的血管网不断长入新生骨质内，形成血管化骨块，6-8周后，切断血管吻合口，以包膜内的轴心血管为所培育骨瓣的血管蒂。

6.根据权利要求1至5任一项所述的一种培育带血管蒂骨瓣的方法获得的带血管蒂骨瓣，用于骨缺损修复。