[发明专利]一种胰蛋白酶制备方法

权利要求书

1.一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)胰蛋白酶表达载体的克隆构建：利用Psumo3-AMP载体将Sumo3标签蛋白第92位甘氨酸后连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸；

(2)过表达胰蛋白酶融合蛋白形成包涵体；

(3)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的清洗、溶解；

(4)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的复性：复性液的组分为1.5-2.5M尿素，30-100mM三羟甲基氨基甲烷PH 8.5，10-20mM还原型谷胱甘肽或者半胱氨酸，1-5mM氧化型谷胱甘肽或者胱氨酸；

(5)胰蛋白酶的激活和纯化：充分复性后，经阳离子交换层析纯化出正确折叠的融合蛋白Sumo3-trypsin，经过Sumo特异性蛋白酶2切去Sumo3标签蛋白，经过镍亲和层析纯化出有生物活性的胰蛋白酶。

2.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，所述复性液还包括10-50mM氯化钙。

3.根据权利要求2所述一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，所述复性液的组分为2M尿素，50mM三羟甲基氨基甲烷PH 8.5，15mM还原型谷胱甘肽或者半胱氨酸，1mM氧化型谷胱甘肽或者胱氨酸，50mM氯化钙。

4.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，所述胰蛋白酶种属来源为人源、猪源、牛源或鼠源。

5.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，所述连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸是指连接胰蛋白酶氨基酸序列第24位到最后一位氨基酸的野生型全长形式，或者第24位到最后一位氨基酸之前的任意截短形式，以及全长形式和截短形式对应的氨基酸任意突变形式。