[发明专利]纽莫康定B0的发酵方法

说明书

本发明提供一种新的纽莫康定B0的发酵方法，该方法能够降低发酵过程中纽莫康定C0的含量，大幅降低下游提取工艺的成本。在该方法中使用的菌种为Glarea lozoyensis，在整个发酵过程中补加维生素b5，并严格控制pH，经过该方法得到的发酵液中，纽莫康定C0的含量可由原来的6％降至1.5％。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及抗真菌药物的微生物发酵，具体涉及纽莫康定B0的微生物发酵方法。

背景技术

纽莫康定B0是由霉菌Glarea lozoyensis发酵合成的次级代谢产物。Glarealozoyensis发酵产物除目标产物B0之外，有A0、B1、B2、C0、D0、E0等12种类似物，其中C0的结构和B0最为接近，两者的结构差异在于B0中的反式3-羟基脯氨酸，在C0中是反式4-羟基脯氨酸。

纽莫康定B0 Cas：135575-42-7

纽莫康定C0 Cas：144074-96-4

现有技术主要采用的是树脂柱工艺对纽莫康定B0进行提纯，柱层析应用于工业化生产时，费时，溶剂使用量大，易造成环境污染，且原料损耗大，使得生产成本大幅提高。C0是纽莫康定B0的异构体，在结构上的差异表现为一个羟基位置的不同；C0杂质不能在反相色谱中与纽莫康定B0分离，只有通过正相色谱分离。发酵液中的C0杂质一般10%，如果不能得到有效的控制，最后得到的是纽莫康定B0和C0的混合物。C0杂质能参与后续反应，严重影响醋酸卡泊芬净的质量。

发明内容

为解决上述问题，本发明人经过摸索，开发出了一套新的纽莫康定B0的发酵方法，该方法能够降低发酵过程中纽莫康定C0的含量，大幅降低下游提取工艺的成本。

在该方法中使用的菌种为Glarea lozoyensis，所述发酵条件如下：

发酵培养基(wt)：乳糖3.0％，苏氨酸1.0％，酵母粉1.0％，脯氨酸1.2％，KH₂PO₄0.15％，七水合硫酸镁0.05％，MES缓冲盐1.5％，pH 5.3。

发酵过程中温度24~26℃，起始通气量0.5~1.0VVM，罐压0.04~0.06Mpa。发酵过程中逐渐调高通气量与转速使溶氧不低于20%，转速最大600转/min，通气量最大1.2VVM。

发酵48h后，开始补加维生素b5，按照培养基的体积，添加量为20~40mg/l。

发酵72h后(通气量与转速已调至上限)，根据溶氧量变化调节pH控制范围，直到发酵结束：溶氧量不低于45%时，控制pH5.0~5.4；溶氧量为35%~45%时，控制pH5.4~5.8；溶氧量为25%~35%时，控制pH5.8~6.2；溶氧量低于25%时，控制pH6.2~6.6。

经过发酵获得的发酵液中纽莫康定C0的含量可由原来的6%降至1.5%。

具体实施例

实施例1

发酵菌种：Glarea lozoyensis

发酵培养基(wt)：乳糖3.0％，苏氨酸1.0％，酵母粉1.0％，脯氨酸1.2％，KH₂PO₄0.15％，七水合硫酸镁0.05％，MES缓冲盐1.5％，pH 5.3。

50L发酵罐培养，培养基30L，121℃消毒30分钟。种量1.5L，发酵液培养温度25℃，起始通气量0.9VVM，200转，罐压0.05Mpa，发酵过程中逐渐调高通气量与转速使溶氧不低于20%，转速最大600转/min，通气量最大1.2VVM。