[发明专利]肺炎球菌多糖的定量检测方法

说明书

本发明公开了一种肺炎球菌多糖的定量检测方法。本方法以便宜易得的单糖制作组合糖作为标准品，代替外购多糖标准品，以组合糖和外购标准糖分别建立标准曲线，对同一批待测肺炎球菌多糖样品进行检测，两者检测结果进行比较得出校正系数，在以后的检测中，以组合糖代替外购标准糖，建立标准曲线，检测肺炎多糖样品浓度，通过校正系数校正，得出待检样品的最终浓度，该结果与外购标准糖作为标准品检测样品结果之间偏差不大于5％。本发明中组合糖所用各单糖便宜易得，分析方法简单，大大降低了分析成本，克服了外购标准糖成本昂贵的问题，实验结果偏差小，容易推广，在适当操作条件下，偏差可控制在0.4％内，可作为肺炎球菌多糖定量检测方法。

技术领域

本发明属于药物分析领域，涉及一种肺炎球菌多糖的定量检测方法。

背景技术

肺炎球菌是引起儿童侵袭性脑膜炎、肺炎和中耳炎的主要病原菌之一，是导致成人和儿童罹患肺炎疾病住院甚至死亡的重要原因，肺炎球菌是一种革兰阳性菌，其基 本毒力因子为荚膜多糖，按荚膜多糖抗原性的不同，可将其分为不同的血清型。迄今 为止，23个血清型的肺炎链球菌多糖疫苗已经研制成功，在23价肺炎球菌多糖疫苗 成品指控项目中，23价肺炎球菌多糖含量是疫苗的重要检测指标。

现有的多糖定量检测方法有显色法，如蒽酮-硫酸法(吴凯、代泽友，改进的蒽酮法检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中多糖浓度(中国生物制品学杂志，2007，20(7)： 536-538)，但该方法只是简单的用葡萄糖作为标准品，通过建立标准曲线来获取肺炎 球菌多糖含量，所以结果往往与真实值偏差较大。因此，开发一种操作简单、测定结 果准确的肺炎球菌多糖定量检测方法，特别是多糖标准品的选择是目前亟待解决的问 题。

发明内容

本发明的目的是提供一种肺炎球菌多糖的定量检测方法。

本发明提供的肺炎球菌多糖的定量检测方法，包括如下步骤：

1)以一系列不同浓度的肺炎球菌多糖标准品与其相应的吸光度建立肺炎球菌多糖标准品的标准曲线；

2)配制不同浓度的肺炎球菌组合多糖，该浓度记为C_组合理论；

根据步骤1)所得肺炎球菌多糖标准品的标准曲线，测定所述肺炎球菌组合多糖的检测浓度，该浓度记为C_组合检测；

定义C_组合理论×校正系数＝C_组合检测；

所述肺炎球菌组合多糖由单糖组成；所述单糖的种类与摩尔比与所述步骤1)中所述肺炎球菌多糖标准品所含各单糖种类和摩尔比一致；

3)以一系列不同C_组合理论的步骤2)所述肺炎球菌组合多糖与其对应的吸光度建立肺炎球菌多糖组合多糖的标准曲线；

4)将待测样品的吸光度代入步骤3)所述肺炎球菌多糖组合多糖的标准曲线，获得对应的所述待测样品的多糖浓度，记为C_待测，则所述待测样品的实际多糖浓度为所 述校正系数×C_待测。

上述方法中，所用肺炎球菌多糖标准品可购自丹麦国立血清研究所；