[发明专利]一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用

权利要求书

1.一种醛酮还原酶基因重组共表达载体，其特征在于所述重组共表达载体为双质粒，所述双质粒分别将SEQ ID NO：1所示醛酮还原酶突变体基因导入质粒pET-28b，SEQ ID NO：3所示葡萄糖脱氢酶基因导入pETDuet-1构建而成。

2.一种由权利要求1所述醛酮还原酶基因重组共表达载体构建的重组基因工程菌。

3.一种权利要求2所述重组基因工程菌在催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以醛酮还原酶基因重组共表达载体构建的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯为底物，以葡萄糖为辅助底物，以pH7.0、200mM磷酸钾缓冲液为反应介质构成反应体系，在30℃、450转/分钟条件下进行转化反应，反应结束后，获得含6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的转化液，转化液分离纯化，获得6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应体系中，底物初始浓度为20-100g/L，辅助底物初始浓度为10-150g/L，催化剂用量以菌体干重计为10-40g/L。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将醛酮还原酶基因重组共表达载体构建的重组基因工程菌接种于含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，于37℃培养9小时，获得种子液；再将种子液以体积浓度5％的接种量转接到含有终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养至菌体浓度OD₆₀₀ 0.6～0.8，然后加入终浓度为12g/L乳糖，28℃诱导培养12小时后，4℃、8000转/分钟离心10分钟，弃上清，获得湿菌体用生理盐水洗涤两次，4℃、8000转/分钟离心10分钟，收集菌体细胞，即为生物催化剂。