[发明专利]一种H7亚型禽流感病毒血凝素抗体间接ELISA检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种H7亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，包含抗体检测板，抗体检测板以H7N9亚型禽流感病毒全长HA蛋白为抗原包被。所述H7N9亚型禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明试剂盒特异性强，敏感度高，安全性好。本发明的试剂盒基于昆虫细胞杆状病毒表达系统表达的全长HA蛋白，该蛋白为非流感病毒来源，因此安全性好，经过连续阴‑阳离子交换层析纯化方法纯化后几乎不含杂蛋白，只与H7亚型禽流感病毒阳性血清特异结合，与其他亚型禽流感病毒或其他禽疫病阳性血清无交叉反应。本发明试剂盒操作简单，方法快速有效，结果判定准确、可靠。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种H7亚型禽流感病毒血凝素抗体间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

甲型流感病毒属于正黏病毒科，可以感染禽类、哺乳动物和人类。甲型流感病毒根据血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同分为不同的亚型。目前已知的有18种不同HA亚型(H1～H18)和11种NA亚型(N1～N11)。

H7亚型的禽流感病毒为高致病性禽流感病毒(HPAIV)，对家禽表现为发病迅速、临床症状严重和高死亡率。一般情况下，禽流感病毒不会突破种间屏障感染人，然而2013年2月H7N9亚型流感病毒在我国首次发生了感染人的事件，并引发了从2013年3月至2016年8月的4次发病高峰。截至2016年11月，实验室确诊H7N9感染病例800例，死亡率约为35％～40％。生物信息学分析显示H7N9流感病毒感染人是通过活禽市场受感染的活禽传播的。同时，虽然之前的研究表明H7N9禽流感病毒感染鸡群后表现为低致病性或者不致病，但是最近的研究显示变异的H7N9禽流感病毒的感染会对鸡致死。H7亚型禽流感病毒不仅影响了人类的生命健康，同时严重影响畜禽养殖业的持续稳定发展。因此，建立一种高灵敏度的H7亚型禽流感病毒的抗体检测方法对鸡群进行血清学监测十分必要，对其诊断具有非常重要意义。

目前H7亚型禽流感病毒抗体的血清学检测方法主要为血凝抑制试验(HI试验)，但是HI试验灵敏度较低，而间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法具有灵敏度高、特异性好等优点。因此，开发一种特异的、敏感的、操作简便的H7亚型禽流感病毒抗体检测试剂盒对鸡只H7亚型流感病毒抗体水平进行实时监测具有重要意义。而以往的禽流感病毒抗体间接ELISA检测试剂盒通常是基于原核表达的HA蛋白的HA1段，这种截短蛋白通常不具备天然构象，没有生物学功能，对检测的灵敏度方面可能有一定欠缺。因此，需要研发一种高灵敏性的H7亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测试剂盒。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种H7亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒以真核表达的具有生物学功能的全长HA蛋白为抗原，使得其具有高灵敏性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种H7亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，包含抗体检测板，抗体检测板以H7N9亚型禽流感病毒全长HA蛋白为抗原包被。

优选地，所述H7N9亚型禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1-3所示。

优选地，所述H7N9亚型禽流感病毒全长HA蛋白的制备，包括以下步骤：

S1、HA蛋白的表达和细胞的收集；

S2、裂解细胞并收集裂解液；

S3、裂解液进行连续的阴-阳离子交换层析。

优选地，步骤S1包括如下具体步骤：通过Bac-to-Bac系统构建包含H7亚型血凝素基因全长片段的重组杆状病毒；将重组杆状病毒感染昆虫细胞，培养后离心收集沉淀。