[发明专利]一种利用唾液检测人体疲劳的方法

说明书

本发明公开了一种利用唾液检测人体疲劳的方法，包括提取收集唾液、向收集的唾液中加入吸附剂和蛋白酶抑制剂、检测唾液中特定蛋白的含量等步骤，是通过检测唾液中特定蛋白的含量来确定健康状况。本发明属于人体蛋白的检测领域，是一种非侵入式的标志物检测方法，不会破坏人体组织，其具有无创、无痛、快速的优点，具有重要社会意义和应用前景。

技术领域

本发明涉及一种利用唾液检测人体疲劳的方法，属于蛋白质检测技术领域。

背景技术

蛋白质约占人体全部质量的18％左右，其与生命活动现象紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸(Amino acid)按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

在现有技术中，蛋白质的提取、检验更多的是采用例如：抽血等人体侵入式的提取方式。2008年，美国南加州大学的丹尼(Denny)等在《蛋白组学研究杂志》发表文章指出，人的唾液中有1166种蛋白质。其中大部分蛋白质能同时在血浆和泪液中找到。当时研究者就提出，从这些蛋白质中可以找到与疾病相关的生物标志物，从而为今后的临床诊断提示一种新方式。随后也有研究陆续发现，人唾液中的C反应蛋白、α-1B糖蛋白、肌酐等水平与心血管疾病、癌症、肾脏病等相关。但是，迄今尚未建立一种无创、便捷的唾液中蛋白质提取和检测技术。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是如何提供一种非侵入式的用生物分子进行蛋白质检测的方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

A、提取收集疑似疲劳人体的唾液；

B、向收集的唾液中加入吸附剂和蛋白酶抑制剂；

C、检测唾液中特定蛋白的含量。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤A中提取唾液的具体方法是：先 用生理盐水漱口不少于两次，再用清水漱口不少于两次，然后收集唾液。

本发明技术方案的进一步改进在于：每次漱口所用生理盐水或清水的体积为20～30ml，每次的漱口时间为20～30s，漱口所用生理盐水或清水的温度为20～35℃。

本发明技术方案的进一步改进在于：唾液收集量不小于0.1毫升。

本发明技术方案的进一步改进在于：唾液收集后需要储存在-80～-70℃下。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤B中吸附剂为PEG、聚乙烯吡咯酮、蔗糖或凝胶的一种，蛋白酶抑制剂为亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑弹性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素的混合物，步骤C中的特定蛋白为核连蛋白-2、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶或金属蛋白酶中的一种或者它们的组合。

本发明技术方案的进一步改进在于：检测唾液中蛋白的方法是：

将唾液进行离心处理得到上清液Ⅰ，向上清液Ⅰ中滴入蛋白质提取剂后冷冻一段时间，得到冷冻液；

将冷冻液进行离心处理，取出下层液并再次冷冻，得到蛋白干粉；

将蛋白干粉溶于水化液中，并离心处理，得上清液Ⅱ并与NH₄HCO₃溶液混合，再次离心处理后向得到的上清液中加入胰酶并控温消化酶解，然后进行分子标记并测得蛋白的含量。

由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：

本发明是通过特定方法提取人体唾液进行蛋白质检测，是一种非侵入式的生物分子检测方法，不会破坏人体组织，其具有无创、无痛、快速的优点。唾液作为体液之一，随时都可以方便地收集到，无创、无痛。其适用于人体，也可以延伸到动物体等。