[发明专利]一种六神丸中蟾蜍二烯内酯类成分检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体涉及六神丸中蟾蜍二烯内酯类成分检测方法，属于中药成分分析领域。

背景技术

六神丸由麝香、牛黄、蟾酥等中药组成，属于国家中药保护品种，具有清凉解毒，消炎止痛的功效，适用于烂喉丹痧，咽喉肿痛，喉风喉痈，单双乳蛾，小儿热疖，痈疡疔疮，乳痈发背，无名肿毒。其中所含药味蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufogargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B.melanostictus Schneider的干燥分泌物，其性味甘辛、温，有毒，具有解毒、消肿、醒神、开窍、强心和止痛等作用。根据文献报道，蟾酥主要活性成分为蟾蜍二烯内酯类化合物，该类化合物具有显著的洋地黄样作用、升压、呼吸兴奋和抗肿瘤作用。

现有文献报道中，已有学者采用紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法对蟾酥及其制剂中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基进行了定量分析，但未见对和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒等其它蟾酥二烯内酯类化合物同时测定的报道。

六神丸目前执行标准为《卫生部药品标准中药成方制剂第十八册》(标准编号：WS3-B-3374-98)，标准中含量测定项中只有牛黄中胆酸的含量测定项。学术论文(邹瑾丽,祁海宏.HPLC法测定六神丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量[J].中国临床药学杂志,2007,16(1):49-50.)公开了一种同时测定六神丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基两个蟾蜍二烯内酯类成分的含量方法；学术论文(王建,倪坤仪,于如报.六神丸中蟾毒内酯化合物的HPLC分析[J].中国药科大学学报,1991,22(6):372-374.)公开了六神丸中总蟾毒内酯类化合物含量。但由于蟾酥二烯内酯类化合物的极性非常接近，目前色谱条件并没有达到分离蟾酥二烯内酯类化合物的方法，因此现有技术均不能全面反映六神丸中蟾蜍二烯内酯类化合物含量水平，不能很好的控制产品的质量，存在一定的缺陷。

蟾酥既是六神丸中有效成分，也是毒性成分，为对六神丸产品中蟾蜍二烯内酯类成分进行全面检测和分析，本发明对六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类成分检测方法同时进行了研究，为制定新的质量标准和有效控制产品质量提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种六神丸中蟾蜍二烯内酯类成分检测方法。该方法能够同时检测极性接近的9种蟾蜍二烯内酯类成分，简便快速、准确可靠，专属性强，重现性好，可用于六神丸产品的质量控制，具有重要的意义。

为实现以上目的，本发明的技术解决方案是：

一种六神丸中蟾蜍二烯内酯类成分检测方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵和蟾毒灵，用甲醇溶解并定容，得到混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取六神丸适量，研磨粉碎，取粉末适量，精密称定，精密加入醇适量，提取，放冷，用醇补足失重，摇匀，离心，取上清液，得供试品溶液；

(3)测定法：分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入HPLC，按标准曲线法测定蟾蜍二烯内酯类成分的含量；

色谱条件：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A相为乙腈，B相为水，梯度洗脱；检测波长：245nm～360nm；柱温35℃～45℃；流速0.8ml/min～1.2ml/min；进样量5μl～20μl。

作为优选方案，六神丸中蟾蜍二烯内酯类成分检测方法，步骤(1)对照品溶液的制备：分别取华蟾酥毒基(CAS:470-37-1)、脂蟾毒配基(CAS:465-39-4)、和蟾蜍他灵(CAS:465-11-2)、沙蟾毒精(CAS：464-74-4)、远华蟾毒精(CAS:472-26-4)、去乙酰华蟾毒它灵(CAS:4099-30-3)、蟾毒它灵(CAS:471-95-4)、华蟾毒它灵(CAS:1108-68-5)和蟾毒灵(CAS:465-21-4)对照品适量，精密称定，以甲醇溶解并定容，制成质量浓度分别为华蟾酥毒基468.11μg/ml、脂蟾毒配基331.56μg/ml、和蟾蜍他灵70.39μg/ml、沙蟾毒精257.78μg/ml、远华蟾毒精261.89μg/ml、去乙酰华蟾毒它灵42.96μg/ml、蟾毒它灵214.73μg/ml、华蟾毒它灵366.44μg/ml、蟾毒灵241.56μg/ml的混合对照品储备液；

步骤(2)所述的供试品溶液的制备：