[发明专利]一种真菌多糖类抗性诱导剂及其应用在审

专利信息
申请号: 201710053746.2 申请日: 2017-01-22
公开(公告)号: CN106929429A 公开(公告)日: 2017-07-07
发明(设计)人: 刘爱新;张莉;李现道;包自超;杜传印;刘春菊 申请(专利权)人: 山东农业大学;山东烟草研究院有限公司;山东潍坊烟草有限公司
主分类号: C12N1/14 分类号: C12N1/14;C12P19/04;A01N43/16;A01P21/00;A01P1/00;C12R1/645
代理公司: 济南舜源专利事务所有限公司37205 代理人: 苗峻,赵斌
地址: 271018 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 真菌 多糖 抗性 诱导剂 及其 应用
【说明书】:

技术领域:

发明属于真菌多糖类抗性诱导剂领域,涉及一种真菌多糖类抗性诱导剂及其应用,特别涉及一种马勃多糖的获得,以及其对烟草幼苗生长的影响及对烟草花叶病毒的抑制作用。

背景技术:

真菌多糖是一类天然高分子化合物,它由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起的多聚物构成,是生命的四大基本物质之一,广泛存在于真菌特别是大型真菌的细胞壁中,因其具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等作用而被医药界广泛关注。真菌多糖有螺旋状的三维立体结构,其构型近似于DNA,是一种β型的多糖。常见的有几丁聚糖、氨基寡糖素、菇类蛋白多糖等,

烟草病毒病是烟叶生产中最重要的病害之一,被称为植物“癌症”,由于迄今为止尚无有效的防治措施,其造成的经济损失已大大超过了烟草真菌病害和细菌病害,成为威胁烟草生产的最大的一类灾害。

植物抗病诱导剂因其环境友好性、系统性、广谱性等优点已经被广泛研究和应用,潜力巨大。国内外已报道有大量的抗病诱导剂研制并成功应用。许多研究表明,许多大型真菌多糖不仅具有抑杀真菌和病毒的作用,而且能够调节作物生长,诱导植物产生抗性。作为天然化合物,真菌多糖还具有无毒、易被降解、对环境无污染等特性,使其有可能作为一种新型植物抗病诱导剂在农业生产中发挥作用。

而马勃是常用的药用真菌,其药用成分包括马勃多糖、甾体类化合物等,在抗肿瘤、抗炎、止血和抑菌等方面有广泛的应用价值,但在诱导植物抗病性和促生等方面尚未见相关研究和报道。

发明内容

针对现有技术存在的诸多不足之处,本发明首先提供了一种大型真菌,命名为马勃(Calvatia sp.)DBM,并于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12505;利用该真菌获得的马勃(Calvatia sp.)DBM多糖处理烟草幼苗后,烟草幼苗的鲜重、最大叶面积、叶绿素含量及净光合速率等与对照相比均明显提高。DBM多糖处理烟草叶片后,对烟草花叶病毒有较好的抑制效果。

本发明是通过如下技术方案实现的:

本发明首先提供了一种大型真菌马勃,马勃样品由发明人于2015年8月采自山东泰山,并分离获得菌种,菌种现保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

获得上述真菌后,发明人对其进行了生物保藏,其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12505;

在上述真菌的基础上,发明人进一步给出了利用其制备马勃多糖的方法如下:

用5mm打孔器从DBM菌落边缘打取直径5mm的菌落圆片,挑取一片接种于PDA培养基中央,放置于28℃恒温箱中培养7d后,采用相同的方法在菌落边缘打取直径5mm的菌落圆片4-5片转接于装有100mL发酵培养基的250mL三角瓶中,28℃,220rpm培养7d,5000rpm离心10min收集菌丝体,无菌水充分洗涤;

其中所述的DBM菌落为保藏编号为CGMCC No.12505的马勃真菌菌落;

所述发酵培养基组成按重量百分比计为:

冷榨豆饼粉,1%;酵母粉,0.2%;蔗糖,3%;硫酸镁,0.05%;磷酸二氢钾,0.1%;维生素B1,0.01%,余量为无菌去离子水;

菌丝体于65℃烘箱烘至恒重,干菌丝在研钵中研细,过80目筛子制成干粉;菌丝体干粉加40倍体积水80℃水浴浸提2h,重复两次,合并两次提取液,浓缩至原体积的1/15,向浓缩液中缓慢加入3倍体积的95%乙醇,4℃静置过夜后8000rpm离心10min留取沉淀,沉淀分别以95%乙醇洗涤一次、丙酮洗涤两次,真空干燥得到多糖粗提物。

对粗提物的理化性质进行初步鉴定发现,该粗提物为白色粉末,溶于水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚和正丁醇。粗提物溶于水后为透明溶液,在较高浓度时呈粘稠状。Molish反应中,在粗提物溶液和浓硫酸的液面交界处形成紫环,表明粗提物中含有多糖成分。粗提物溶液与Fehling试剂反应均显阴性,没有砖红色沉淀产生,表明不含有还原性糖。

通过用苯酚-硫酸法测定得知上述获得的DBM多糖粗提物中的总糖含量为84.9%。

发明人进一步对上述获得的多糖粗提物进行了功能研究,结果如下:

将上述多糖粗提物溶解后可获得不同浓度的多糖溶液,选择1000mg/L和2000mg/L两个浓度的多糖溶液喷雾处理烟苗,结果发现:

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