[发明专利]硫氢化钠在促进大肠杆菌外源蛋白质表达中的应用有效
申请号: | 201710054947.4 | 申请日: | 2017-01-24 |
公开(公告)号: | CN107058169B | 公开(公告)日: | 2020-06-12 |
发明(设计)人: | 刘志强;裴雁曦 | 申请(专利权)人: | 山西大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/38;C12P21/02;C07K14/435;C12R1/19 |
代理公司: | 山西五维专利事务所(有限公司) 14105 | 代理人: | 张福增 |
地址: | 030006 山*** | 国省代码: | 山西;14 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 氢化 促进 大肠杆菌 蛋白质 表达 中的 应用 | ||
本发明提供了硫氢化钠在促进大肠杆菌外源蛋白质表达中的应用。将硫氢化钠配制成5~15μmol/L硫氢化钠水溶液,加入到IPTG诱导大肠杆菌外源蛋白质表达的体系中,可促进外源蛋白质的表达。
技术领域
本发明涉及硫氢化钠的新用途,确切地说是硫氢化钠在促进大肠杆菌外源蛋白质表达中的应用。
技术背景
IPTG诱导大肠杆菌外源基因表达是分子生物学和基因工程结合的经典方法,为促进分子生物学的发展提供了强有力的帮助。大肠杆菌外源基因表达系统具有遗传背景清楚、操作简单、生长繁殖快、产量高、表达产物纯化过程简单、产物稳定性好、不易污染以及应用范围广等优点,被广泛应用于各种重组蛋白表达。目前,人们已经利用大肠杆菌表达了多种蛋白产品,如抗生素、激素、免疫制剂、抗肿瘤药物、蛋白酶制剂等。
尽管大肠杆菌蛋白表达体系优点众多,但由于基因结构、mRNA稳定性和翻译效率、蛋白质折叠等差异,以及宿主细胞蛋白酶对外源蛋白质的降解等原因,并非每一种蛋白质都能被有效表达。因此,促进外源蛋白质在大肠杆菌中有效表达的方法具有重要意义。
硫氢化钠溶于水会释放硫化氢,硫化氢作为气体信号分子,在动物体内具有抑制细胞增殖、降低血压、调节血管及神经系统等功能;在植物体中,硫化氢可以调节植物气孔运动、缓解氧化伤害、提高植物对干旱、低温、重金属等胁迫的耐受。
发明内容
本发明旨在提供硫氢化钠在促进大肠杆菌外源蛋白质表达中的应用,提高外源蛋白质的含量。
本发明提供硫氢化钠在促进大肠杆菌外源蛋白质表达中的应用。以分别含有外源GFP,RFP基因的大肠杆菌BL21菌株为实验材料,在IPTG诱导GFP,RFP外源基因表达的体系中,加入一定浓度的硫氢化钠可以促进外源基因表达。
所述硫氢化钠浓度为10mmol/L,现配现用。诱导大肠杆菌表达外源基因时,将配置的硫氢化钠水溶液与IPTG同时加入到大肠杆菌培养液LB中,硫氢化钠在LB培养液中的终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L。优选浓度为10μmol/L
试验结果表明本处理方法可以促进外源GFP,RFP基因的表达,GFP和RFP蛋白质含量升高。
附图说明
图1是0、5μmol·L-1、10μmol·L-1和15μmol·L-1终浓度的硫氢化钠对三种IPTG浓度诱导下(0.1mmol·L-1,0.5mmol·L-1,1mmol·L-1),大肠杆菌表达GFP蛋白的情况,A是利用酶标仪检测GFP的荧光值;B结果示意图。
图2是0、5μmol·L-1、10μmol·L-1和15μmol·L-1终浓度的硫氢化钠对三种IPTG浓度诱导下(0.1mmol·L-1,0.5mmol·L-1,1mmol·L-1),大肠杆菌表达RFP蛋白的情况,A是利用酶标仪检测RFP的荧光值;B结果示意图。
图3是三种浓度的IPTG诱导大肠杆菌BL21菌株表达GFP/RFP蛋白时,5μmol·L-1、10μmol·L-1和15μmol·L-1终浓度的硫氢化钠相对于不加硫氢化钠诱导时,促进GFP/RFP蛋白表达的百分比。
图4是三种浓度的IPTG诱导大肠杆菌BL21菌株表达GFP/RFP蛋白时,0、5μmol·L-1、10μmol·L-1和15μmol·L-1终浓度的硫氢化钠处理后,大肠杆菌BL21菌株表达GFP/RFP蛋白的SDS-PAGE电泳检测。
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