[发明专利]一种由四神丸制备的含药血清及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物药物领域，具体涉及一种由四神丸制备的含药血清及其制备方法和在治疗结肠癌上的应用。

背景技术

由于全球经济的高速发展，城市化、工业化、人口老龄化进程不断加快，环境污染逐渐加重，生活方式不断改变(尤其是饮食)，导致恶性肿瘤的发病率和死亡率不断升高，并呈持续上升趋势。结肠癌(cancer of colon)是消化系统最常见的恶性肿瘤，与饮食的关系最为密切，是我国九大常见恶性肿瘤之一。结肠癌的首选治疗方式仍然是尽早进行外科手术切除，但是由于每个人身体状况和病情不一样，一般手术后复发和转移的几率是很大的，而且手术价格昂贵。而中医治疗向来是寻求达到治本的目的，且费用相对较低，因此寻求合适的中药进行开发、研究，成为国内外学者坚定不移的研究方向。已有学者在研发中药治疗疾病的进程上取得了不小的成就，例如：2015年10月，药学家屠呦呦女士因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔科学奖。因此新的植物型药物的开发和研制有不可小觑的潜力。

中药作为一类天然药物，已经在中国沿袭了几千年。中药具有多靶点的特点，这与肿瘤是由于多环节突变而非单一原因而发生的、多级的、多途径的和多病灶的特点是相吻合的，因此中药在结肠癌的预防及治疗中更有优势。本发明中用到的四神丸就是典型的中药方剂。四神丸初次发现于宋代陈文忠著作的《陈氏小儿病源痘诊方论》一书中，其由《普济本事方》中记载的二神丸(即肉豆藉、补骨脂组成)和五味子散(即五味子、吴茱萸组方)两剂药方组成。两剂药方并用相辅相成，温补脾肾，对固肠止泻等症状药用效果极佳。随着时代的发展，该方己经超出了原有方剂的应用范围，临床中也以其作为基础方广泛应用于各科室，并取得了良好的疗效。我们现今用的四神丸是由补骨脂、吴茱萸、肉豆蔻、五味子、生姜和红枣六位药材组成的，是治疗脾肾虚寒型结肠炎的中药方剂，对过敏性结肠炎、慢性结肠炎、溃疡性结肠炎等症均有良好疗效，且已证实其能够较佳地消除结肠炎相关的各种症状和有效修复、保护病人的肠粘膜。中药的给药方式主要有：口服给药、灌肠给药以及二者联合用药。因此运用中药预防与治疗癌症是中医药发展的必然趋势。

中药血清药理学的相关研究在近年来中药或中药复方研究中有了新的进展，它主要是通过模拟中药或中药复方在体内的消化、吸收、转化、代谢的一些过程，然后通过采集服用(或注射)中药的动物的血液并分离血清，进行体外培养实验研究的一种新的方法。中药服用或注射的方法及简称如下：静脉注射(iv)、腹腔注射(ip)、口服(po)、皮下注射(ih)、灌胃(ig)、肌注(im)、静滴(iv)等。这种实验方法的提出，既可以在一定程度上排除中药或中药复方直接进行体外实验产生的难以确定的因素干扰，也可以使实验结果的可信度大大提高，更重要的是中药血清使疗效更加显著。芦冲等研究发现，半枝莲醇提物灌胃大鼠后获得的含药血清对HT-29人结肠癌细胞有抑制作用，作用机制可能不仅与抑制细胞生长有关，还与阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。范钦等研究发现，九香虫灌胃后处理得到的含药血清孵育SW480人结肠癌细胞，可促使结肠癌细胞凋亡，并影响凋亡相关因子P53、FADD的表达，从而达到抗肿瘤作用。肖海娟等研究发现，肠胃清含药血清能够逆转HCT116人结肠癌铂类化疗耐药，其机制与促进肿瘤细胞DNA损伤、诱导凋亡有关。李素云等研究发现，扶正抑癌方含药血清通过上调上皮钙黏蛋白表达和下调神经钙黏蛋白的表达，抑制LoVo人结肠癌细胞的间叶表型细胞即发生上皮间质化转变，从而降低lovo细胞的侵袭力和运动能力。目前常用的结肠癌细胞系有HCT116，HCT8，HT-29，LS174T，LoVo，SW480，SW620等。但暂未发现使用由四神丸含制备的药血清对LS174T结肠癌细胞做相关研究的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种由四神丸制备的含药血清；该含药血清可有效抑制结肠癌细胞的增殖、促进其凋亡、抑制其转移。

本发明还提供一种由四神丸制备的含药血清的制备方法及其应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一种由四神丸制备的含药血清，所述含药血清为将四神丸对大鼠进行灌胃后，采血得到。

其中，所述四神丸由肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸和大枣组成，经磨粉、煮沸、煎煮后，将提取液过滤并且蒸馏浓缩得到膏体，再经冷冻干燥后粉碎得到。

所述所大鼠为清洁级SD雄性大鼠，大鼠购自扬州大学比较医学中心，体重为250～400g。

本发明所述的由川芎醇提物制备的含药血清的制备方法，包括如下步骤：