[发明专利]一种由脏毒清制备的含药血清及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物药物领域，具体涉及一种由脏毒清制备的含药血清及其制备方法和在治疗结肠癌上的应用。

背景技术

结肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，它的发病率和死亡率在世界上分别居于第二位和第三位，四十到五十岁之间发病率最高，且男性发病率为女性的2到3倍，早已成为威胁人类健康的重大疾病之一。结肠癌主要为腺癌、黏液腺癌、未分化癌，其主要发病原因是高脂肪食物摄入过多和纤维素摄入不足。近年来，临床上对结肠癌的治疗已取得较大进步，目前西医治疗结肠癌多采用手术、放化疗等方法，但总体治疗效果仍不佳。因此，探索新型低毒高效的抗结肠癌中医药非常有意义。中药是中华民族的宝贵财富，有史以来为中华民族的繁衍昌盛做出了巨大贡献，其治疗理念源远流长，符合先进医学的发展方向，抗肿瘤有独特的优势。中医认为，结肠癌是由于脏腑不和，正气虚弱或气滞血瘀，毒邪凝聚所致，一般都会采用具有扶正固本、清湿消热等功能的中药配方进行治疗。

脏毒清(ZDQ)是由闻名全国的老中医--河南中医学院一附院终身教授张东岳先生总结了治疗结肠癌等肛肠病的多年经验的基础上，精心筛选整理而成，其中药方剂为当归15g，党参20g，焦白术30g，半枝莲30g，山慈菇20g，白花蛇舌草30g，白头翁30g，炙鳖甲20g。当归功效在于补血，活血，调经止痛，润燥滑肠；党参功效在于补中益气，健脾益肺；焦白术功效在于健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎；半枝莲功效在于凉血解毒，散瘀止痛，消肿和清热利湿；山慈菇功效在于清热解毒，消痈散结；白花蛇舌草功效在于清热解毒、消痛散结、利尿除湿；白头翁功效在于止痢解毒；炙鳖甲功效在于滋阴潜阳，软坚散结。该方剂中八味药材相辅相成，具有抗炎消肿攻毒，益气健脾养血，和胃化瘀止痛，软坚散结消瘤的功效，临床上常被应用于各种正虚邪恋型大肠肿瘤及脏毒证等疾病并取得良好疗效。

中药血清药理学的相关研究在近年来中药或中药复方研究有了新的进展，它主要是通过模拟中药或中药复方在体内的消化、吸收、转化、代谢的一些过程，然后通过采集服用(或注射)中药的动物的血液并分离血清，进行体外培养实验研究的一种新的方法。中药服用或注射的方法及简称如下：静脉注射(iv)、腹腔注射(ip)、口服(po)、皮下注射(ih)、灌胃(ig)、肌注(im)、静滴(iv)等。这种实验方法的提出，既可以在一定程度上排除中药或中药复方直接进行体外实验所产生的难以确定的因素干扰，也可以使实验结果的可信度大大提高，更重要的是中药血清使疗效更加显著。芦冲等研究发现，半枝莲醇提物灌胃大鼠经处理获得的含药血清对HT-29人结肠癌细胞有抑制作用，作用机制可能不仅与抑制细胞生长有关，还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。范钦等研究发现，九香虫灌胃后处理得到的含药血清孵育SW480人结肠癌细胞，可促使结肠癌细胞凋亡，并影响凋亡相关因子P53、FADD的表达，从而达到抗肿瘤作用。肖海娟等研究发现，肠胃清灌胃大鼠经处理获得的含药血清能够逆转HCT116人结肠癌铂类化疗耐药，其机制与促进肿瘤细胞DNA损伤、诱导凋亡有关。李素云等研究发现，扶正抑癌方灌胃大鼠经处理获得的含药血清通过上调上皮钙黏蛋白表达和下调神经钙黏蛋白的表达，抑制lovo细胞的间叶表型细胞即发生上皮间质化转变，从而降低lovo细胞的侵袭力和运动能力。李傲等研究发现，加味三棱丸灌胃大鼠经处理获得的含药血清可能是通过降低内异症在位内膜细胞雌二醇的分泌水平，从而降低血管内皮生长因子的表达和分泌，发挥其抑制血管生成的作用。安永康等用脏毒清干预体外培养的SW480结肠癌细胞研究发现，脏毒清具有促进人结肠癌细胞凋亡的作用，并通过线粒体凋亡途径发挥作用。目前常用的结肠癌细胞系有HCT116，HCT8，HT-29，LS174T，LOVO，SW480，SW620等。但暂未发现使用脏毒清含药血清对LS174T结肠癌细胞做相关研究的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种由脏毒清制备的含药血清；该含药血清可有效抑制结肠癌细胞的增殖、促进其凋亡、抑制其转移。

本发明还提供一种由脏毒清制备的含药血清的制备方法及其应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一种由脏毒清制备的含药血清，所述含药血清为将脏毒清对大鼠进行灌胃后，采血得到。

其中，所述脏毒清由当归、党参、焦白术、半枝莲、山慈菇、白花蛇舌草、白头翁和炙鳖甲组成，经磨粉、煮沸、煎煮后，将提取液过滤并且蒸馏浓缩得到膏体，再经冷冻干燥后粉碎得到。

所述所大鼠为清洁级SD雄性大鼠，大鼠购自扬州大学比较医学中心，体重为250～400g。