[发明专利]一种具有抑制HIV-1作用的融合基因betaTrCP-CypA及其构建方法

说明书

一种具有抑制HIV‑1作用的融合基因betaTrCP‑CypA及其构建方法；所述融合基因betaTrCP‑CypA，能抑制HIV‑1病毒，其基因序列如SEQ ID NO:1所示。该基因的构建方法，包括以下步骤：人工合成得到优化后的betaTrCP基因N端DNA；以betaTrCP基因N端DNA序列为模板，以B1和B2为引物扩增betaTrCP基因N端DNA片段；以CypAcDNA质粒为模版，以B3和B4为引物扩增CypA部分，得到CypA DNA片段；分别取1µL betaTrCP基因N端部分PCR产物片段和1µL CypA DNA的PCR产物片段作为模板，以B1和B4为引物PCR扩增融合基因betaTrCP‑CypA，中间含5个丝甘氨酸的DNA，扩增出目的条带，克隆入合适的表达载体表达。本发明构建的融合基因betaTrCP‑CypA具有能够降解HIV‑1Gag，从而达到抑制HIV‑1的作用。

技术领域

本发明涉及一种融合基因，具体的说是一种具有抑制HIV-1作用的融合基因betaTrCP-CypA及其构建方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV)俗称艾滋病（Acquiredme deficiency syndrome,AIDS)病毒，诱发人类获得性免疫缺陷综合征。自1984年首次报道艾滋病毒（HIV-1)为引起艾滋病（AIDS)的病原以来，全世界大批顶尖的科学家都致力于攻克这一疫病。 HAART等疗法已显著降低了艾滋病的发生率和死亡率。但是，由于只能抑制HIV-1复制，无法清除细胞内感染的病毒，所以需要长期不间断用药，一旦停药即出现病毒反跳现象。长期大量的服用抗病毒药给患者带来了一系列问题，例如有些药物对病人有线粒体毒性、严重胃肠道反应等副作用等。

目前艾滋病防治方面也有针对HIV-1的有关疫苗，由于H1V基因变异问题，使得HIV-1能逃避免疫系统的监视，这是HIV-1疫苗研制的主要障碍。因此，单纯应用疫苗防治艾滋病效果不理想。

目前有关作用于HIV-1辅助受体方面的药物，似乎也逃避了HIV-1的变异问题，但其作用也只是阻止HIV-1进入细胞，不能降解或杀死病毒。

目前针对HIV-1的HAART等疗法已显著降低了艾滋病的发生率和死亡率。但是，由于只能抑制HIV-1复制，无法清除细胞内感染的病毒，所以需要长期不间断用药，一旦停药即出现病毒反跳现象。

近年来，随着人们对泛素一蛋白酶体途径(ubiq-uitin-proteasome pathway，UPP)认识的不断深人，人们利用UPP具有特异性降解蛋白底物的功能特点，提出了靶向泛素化降解蛋白质技术，也称为蛋白质敲减技术，其核心就是构建某个能够与靶蛋白特异结合的E3，该E3含有两个结构域，即功能结构域和结合结构域。靶向泛素化降解蛋白质技术与基因沉默等技术的比较具有优势，如在敲减对象方面，靶向泛素化降解蛋白质技术能有效针对某一类修饰后的目的蛋白进行敲减，在作用时效方面，在灵活性方面，在应用规模方面更有优势。

发明内容

本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种基于设计的具有抑制HIV-1作用的融合基因betaTrCP-CypA及其构建方法，构建的融合基因betaTrCP-CypA能够降解HIV-1Gag，能抑制HIV-1病毒。

一种具有抑制HIV-1作用的融合基因betaTrCP-CypA，能抑制HIV-1病毒，其基因序列如SEQ ID NO:1所示。

所述基于泛素连接酶抑制HIV-1的融合基因betaTrCP-CypA的构建方法，包括以下步骤：