[发明专利]一种生物磷钾肥及其制备方法在审
申请号: | 201710056276.5 | 申请日: | 2017-01-25 |
公开(公告)号: | CN106748270A | 公开(公告)日: | 2017-05-31 |
发明(设计)人: | 刘加红;高华锋;解燕;孔垂思;杨涛;张瑞勤;余磊 | 申请(专利权)人: | 云南省烟草公司曲靖市公司 |
主分类号: | C05G3/00 | 分类号: | C05G3/00;C05G3/04;C05F17/00 |
代理公司: | 北京鼎宏元正知识产权代理事务所(普通合伙)11458 | 代理人: | 邓金涛 |
地址: | 655000*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物 钾肥 及其 制备 方法 | ||
1.一种生物磷钾肥的制备方法,其特征在于:包括预处理、生物发酵、发酵后处理,其中,
预处理:将油菜秸秆、草炭烘干并粉碎,将磷矿、钾矿和腐殖酸分别粉碎;
生物发酵:将预处理后的油菜秸秆、草炭、磷矿、钾矿和腐殖酸与微生物种子液均匀混合得到混合物A,将混合物A堆捂后自然发酵,至物料变为灰黑褐色,即得生物有机磷钾肥基质;
发酵后处理:将微生物种子液与生物有机磷钾肥基质混合均匀,得到生物磷钾肥。
2.根据权利要求1所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,所述原料预处理是分别将磷矿、钾矿粉碎至≤400目,将油菜秸秆粉碎至长度≤5cm,腐植酸粉碎至粒径≤0.45mm,草炭粉碎至≤0.45mm。
3.根据权利要求1所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,将所述混合物A堆捂后自然发酵20-25天,当温度升至60-64℃时进行翻堆操作。
4.根据权利要求1所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,所述生物发酵步骤中油菜秸秆、草炭、腐植酸、钾矿、磷矿按质量比 10:5-7:1-3:1-3:1-3混合。
5.根据权利要求1所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,所述微生物种子液包括溶磷菌、解钾菌和嗜铁菌。
6.根据权利要求5所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,筛选所述溶磷菌、解钾菌和产嗜铁菌的步骤包括:
1)制备样品稀释溶液:选择含有溶磷菌、解钾菌或产嗜铁菌的土壤10g与 100mL 无菌水混合,静置 20min 后,以 200rpm 在振荡培养箱中充分振荡 30min使细胞分散,上层清液为菌悬液母液,然后将母液稀释成10-4、10-5、10-6稀释度的样品溶液;
2)倒平板:将培养基,在121℃灭菌15-30 min后冷却至60℃,倒平板;
3)涂布:取10-4、10-5、10-6三个稀释度的样品溶液各100μL,均匀的涂布于培养基表面;
4)培养:将涂有菌液的平板在 28-37℃恒温培养箱中倒置培养5-8天;
5)初步筛选:将平板上各菌落的晕圈与菌落直径比按从大到小排列,取直径比最大的5-20株,利用平板划线法分离纯化,将获得的菌株接种至 LB 斜面培养基,置于4℃冰箱内保藏;
6)接种培养:将初步筛选得到的菌株分别接种至培养基,使菌种含量为1011个/g,在37℃ 200rpm 条件下振荡培养;
7)测量:以不接菌种的培养基为对照,每隔8h用测定不同菌株发酵液内可溶性钾、磷或铁的含量,测定3-5次,向发酵液中加入甘油,使甘油的体积分数为20%,置于-20℃冰箱内保藏保存。
7.根据权利要求6所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,
筛选所述溶磷菌使用的培养基的制备方法是:筛选所述溶磷菌使用的培养基的制备方法是:将5g葡萄糖、5g Ca3(PO4)2、0.25g MgCl2•6H2O、0.25 g MgSO4·7H2O、0.2g KCl、0.1g (NH4)2SO4和17g琼脂混合,用去离子水定容至1000mL,PH为6.8-7.2;
筛选所述解钾菌使用的培养基为亚力山鲍罗夫培养基;
筛选所述嗜铁菌使用的培养基的制备方法是:分别取2mL 1mmol/L的CaCl2:溶液、2mL 1mmol/L的MgSO4·7H2O溶液、60mL的10%的酸水解酪蛋白溶液混合,加入生物缓冲液Pipes,调pH6.8-7.0,用去离子水定容到1000mL,加入20g琼脂粉均匀混合;其中所述10%的酸水解酪蛋白溶液混合前在121摄氏度条件下单独灭菌15min。
8.根据权利要求5所述的生物磷钾肥的制备方法,其特征在于,所述微生物种子液中溶磷菌、解钾菌和嗜铁菌的个数比为1:2-3:1.5-2。
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