[发明专利]一种负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架

权利要求书

1.一种负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架，其特征在于：以胶原溶液、壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液和负载KGN小分子的PLGA微球为主要原料制得，所述胶原溶液浓度为0.6wt%，壳聚糖溶液浓度为1wt%，透明质酸钠溶液浓度为1wt%；所述胶原溶液、壳聚糖溶液和透明质酸钠溶液的体积比为1~10:10:1~10。

2.根据权利要求1所述的负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架，其特征在于：所述复合支架中负载KGN小分子的PLGA微球的质量百分数为0.03wt%。

3.根据权利要求1所述的负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架，其特征在于：所述胶原来源于鱼皮、猪皮、牛皮或牛腱。

4.根据权利要求1所述的负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架，其特征在于：所述负载KGN小分子的PLGA微球制备方法如下：

（A）准确称取200 mg PLGA溶于10 mL 二氯甲烷，超声振荡形成油相；

（B）再准确称量10mg KGN置于1 mL的超纯水与甲醇的混合液中，在37℃下使其完全溶解形成内水相；

（C）将步骤（B）所述内水相缓慢注入步骤（A）所述油相中持续搅拌乳化10 min，使其均匀分散形成初乳乳剂；

（D）将步骤（C）所述初乳乳剂按60滴/min滴入含有5 mL 0.1wt%吐温-20的50 mL 1wt% PVA溶液中形成外水相，持续搅拌形成复乳；

（E）将步骤（D）所述复乳充分离心，弃上清液，再经超纯水反复冲洗离心3次，冷冻干燥，在-20℃下避光保存。

5.根据权利要求4所述的负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架，其特征在于：步骤（B）中所述超纯水与甲醇的混合液中，超纯水与甲醇的体积比为1:1。

6.一种如权利要求1~5中任一项所述的负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）分别将胶原、壳聚糖溶于0.1wt%的冰醋酸中制备成胶原溶液和壳聚糖溶液；

（2）将透明质酸钠溶于蒸馏水或去离子水制备成透明质酸溶液；

（3）将步骤（1）所得胶原溶液与壳聚糖溶液混合，漩涡搅拌混合均匀；

（4）将步骤（2）所得透明质酸钠溶液缓慢加入步骤（3）的混合漩涡溶液中，混合均匀；

（5）将负载KGN小分子的PLGA微球加入步骤（4）所得混合溶液中，磁力搅拌过夜，冷冻干燥后添加交联剂进行交联；

（6）交联后用Na₂HPO₃、NaCl和蒸馏水反复冲洗至中性，二次冷冻干燥后即得负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架。

7.根据权利要求5所述的一种负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架制备方法，其特征在于：步骤（5）中所述交联剂是由2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、1-乙基-3（3-二甲基氨丙基）碳化二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺溶于体积浓度为40%的乙醇溶液中制得，其中2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、1-乙基-3（3-二甲基氨丙基）碳化二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的摩尔比为50:33:8。

8.根据权利要求5所述的一种负载KGN的胶原/壳聚糖/透明质酸钠复合支架制备方法，其特征在于：步骤（6）中所述Na₂HPO₃和NaCl分别为0.1M Na₂HPO₃、1M NaCl和2M NaCl。