[发明专利]射线修饰脐带成体干细胞3D微球活制剂及其制备与应用

权利要求书

1.一种射线修饰脐带成体干细胞3D微球活制剂，其特征在于：是在2ml的冻存管中保存有培养5代后的160Gy X射线辐照修饰的脐带成体干细胞3D微球活制剂，干细胞3D微球为8×10³个，球直径为100-120μm，冻存液为人的AB血浆，总体积为1ml，于－196℃液氮中保存待用。

2.制备权利要求1射线修饰脐带成体干细胞3D微球活制剂的方法，其特征在于：于无菌条件下分为以下六个步骤制备：

(1)处理脐带组织：足月生产的脐带组织，捐献者均签署知情同意书,并经过医院伦理委员会同意,将脐带组织剪碎成1cm×1cm×1cm大小,5倍于脐带组织体积的D-Hank’s平衡盐液冲洗3次后收集脐带组织小块；

(2)分离脐带成体干细胞：将脐带组织小块以比例每1ml脐带组织小块加入5ml 0.2％胶原酶液,37℃消化50min,消化终止后用200目滤网过滤,收集单细胞,在收集到的单细胞中以比例1ml细胞体积加入3～5ml红细胞裂解液,4℃水浴5min以去除红细胞,再以5倍于脐带细胞体积的D-Hank’s平衡盐液洗一遍,以50倍于脐带细胞的体积加入配好的低糖DMEM培养基,培养基含10％FBS、5ng/ml bFGF、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和25mmol/L谷氨酰胺，调整培养细胞密度为1×10⁵个/ml,接种于75cm²的培养瓶,置于37℃,5％CO₂,饱和湿度95％的培养箱培养,每3～4天进行换液,传代单纯脐带成体干细胞5次；

(3)脐带成体干细胞的扩大培养：培养5代后，该细胞具有很好的贴壁稳定性；之后，使用滚瓶贴壁培养模式进行扩大化培养；

(4)脐带成体干细胞在悬浮培养体系中转化成3D微球：扩大化培养后干细胞转至摇瓶悬浮培养体系以每分30转速度悬浮培养，转化脐带成体干细胞成为3D微球；

(5)脐带成体干细胞3D微球的射线辐照修饰：通过160Gy X射线辐照脐带成体干细胞3D微球，建立高稳定型的射线辐照修饰化脐带成体干细胞3D微球活制剂，稳定生存率高于95％；

(6)脐带成体干细胞3D微球活制剂的制备：收集上述辐照后脐带成体干细胞3D微球，球直径100-120μm，装入2ml冻存小管，每支8×10³个射线辐照修饰的脐带成体干细胞3D微球,冻存液为人的AB血浆,总体积为1ml,于－196℃液氮中贮存，解冻后直接使用。

3.权利要求1所述的射线修饰脐带成体干细胞3D微球活制剂在制备药物中的应用，其特征在于：制备对肿瘤干细胞产生直接作用而达到抑制肿瘤的发生、发展，作为一种广谱抗肿瘤制剂药物的应用。