[发明专利]一种提高罗汉果悬浮细胞中罗汉果甜甙Ⅴ含量的方法有效
| 申请号： | 201710060100.7 | 申请日： | 2017-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN108277197B | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 宋云飞;杨文国;李元元;郭美锦;李佳瑞;王泽建;庄英萍 | 申请（专利权）人： | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N5/02;C12P33/20 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 汤财宝 |
| 地址： | 541199 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 罗汉果 悬浮 细胞 含量 方法 | ||
1.一种提高罗汉果悬浮细胞中罗汉果甜甙Ⅴ含量的方法，其特征在于，在以初代罗汉果悬浮细胞体系培养成熟罗汉果悬浮细胞的过程中，加入酵母诱导物及茉莉酸甲酯。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述以初代罗汉果悬浮细胞体系培养成熟罗汉果悬浮细胞培养成熟罗汉果悬浮细胞过程中第5～7天加入酵母诱导物10～50mg/L、茉莉酸甲酯50～100μmol/L，第9～11天加入酵母诱导物100～200mg/L、茉莉酸甲酯120～260μmol/L，第17～25天收获成熟罗汉果悬浮细胞。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在所述以初代罗汉果悬浮细胞体系培养成熟罗汉果悬浮细胞培养成熟罗汉果悬浮细胞过程中第7天加入酵母诱导物为50mg/L、茉莉酸甲酯100μmol/L，第11天加入酵母诱导物为180mg/L、茉莉酸甲酯220μmol/L，第19天收获成熟罗汉果悬浮细胞。
4.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述初代罗汉果悬浮细胞体系通过以下步骤获得：
(1)取罗汉果的成熟种胚，在含有蔗糖30g/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、琼脂4.6g/L、pH范围为5.5～6.0的MS半固体培养基上继代培养，选取连续继代3～5次且生长旺盛、质地疏松、状态稳定均一的新鲜胚性愈伤组织；
(2)将步骤(1)得到的新鲜胚性愈伤组织以接种量100g/L转接到含有蔗糖30g/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、pH范围为5.5～6.5的MS液体培养基中，并在转速为150r/min、培养温度为25±2℃、光强为4000lux、光照时间为12h/d的摇床中培养，得初代罗汉果悬浮细胞体系。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤(1)继代次数为4次。
6.一种罗汉果甜甙Ⅴ的制备方法，其特征在于，以权利要求1～3、5任一方法制备的成熟罗汉果悬浮细胞进一步提取分离制备罗汉果甜甙Ⅴ。
7.一种罗汉果甜甙Ⅴ的制备方法，其特征在于，以权利要求4制备的成熟罗汉果悬浮细胞进一步提取分离制备罗汉果甜甙Ⅴ。
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