[发明专利]一种铁皮石斛的质量检测方法

说明书

本发明公开铁皮石斛的质量检测方法，包括：1)以ITS‑26SE和ITS‑17SE为引物，进行测序，以鉴定待测石斛药材的品种；2)对样本容量为n的样本进行色谱检测，获取以化学小分子成分夏佛托苷和/或柚皮素作为参照成分的检测数据；3)对样本分别进行指纹图谱检测，获取铁皮石斛的全化学成分的指纹图谱峰面积值；4)以色谱数据中夏佛托苷和/或柚皮素的成分含量值作为响应变量，将指纹图谱中的其它成分的峰面积值作为自变量建立分析模型，通过Lasso方法筛选变量建立化学小分子成分的相关特征指纹图谱模型。通过一代测序及特征指纹图谱，精确地鉴别和控制铁皮石斛药材的质量。

技术领域

本发明属于中药成份检测分析领域，具体涉及一种铁皮石斛的质量检测方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium catenatum Lindley,Dendrobium officinale KimuraMigo)：又名黑节草。茎直立，少匍匐或斜立，肉质，圆柱形，长9cm～35cm，直径0.2cm～0.4cm，不分枝，具多节，节间长1.3cm～1.7cm；叶基部下延为抱茎的鞘，边缘和中肋常带淡紫色，叶鞘常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张开，并且与节留下一个环状铁青色的间隙。总状花序常从落叶的老茎上部发出，具2朵～3朵花；花序柄长0.5cm～1.0cm，基部具2枚～3枚短鞘；花序轴回折状弯曲，长2cm～4cm；花苞片干膜质，浅白色，卵形，长0.5cm～0.7cm，先端稍钝；花梗和子房长2cm～2.5cm；萼片和花瓣黄绿色，近相似，长圆状披针形，长约1.8cm，宽0.4cm～0.5cm，先端锐尖，具5条脉；侧萼片基部较宽阔，宽约1cm；萼囊圆锥形，长约0.5cm，末端圆形；唇瓣白色，浅绿色或浅黄绿色，基部具一个绿色或黄色的胼胝体，卵状披针形，比萼片稍短，中部反折，先端急尖，不裂或不明显3裂，中部以下两侧具紫红色条纹，边缘多少波状；唇瓣密布细乳突状的毛，并且在中部以上具1个紫红色斑块，或2个分离的紫色斑块；蕊柱黄绿色，长约0.3cm，先端两侧各具1个紫点；蕊柱足黄绿色带紫红色条纹，疏生毛；药帽白色，长卵状三角形，长约0.2cm～0.3cm，顶端近锐尖并且2裂。其茎入药，属补益药中的补阴药：益胃生津，滋阴清热。

石斛一直被人们视为珍贵的中草药，具有十分重要的滋补功效。在临床上，石斛被用于治疗多种疾病，具有增强免疫力、抗氧化、降血糖和抑制癌症等药理功效。由于人为长期无节制采挖及不合理利用石斛，其野生资源日趋减少，市场上出现了一些以假乱真、以次充好的现象。此外，由于石斛品种较多，其品种间的杂交使得其近缘的种存在性状交叉现象，分类区别比较困难。因此，有必要建立石斛的特征指纹图谱对石斛的药材质量进行评价。

色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，作为一种全局分析的全景模式，反映的是样品的整体情况。但在色谱指纹图谱分析过程中，很多数据都是高维的，即数据包含很多属性或特征，比如有关铁皮石斛色谱指纹图谱，就能更好地对铁皮石斛进行描述，但在实际应用中对高维数据直接进行操作将会面临“维数灾难”的问题，“维数灾难”会导致建模过程所需要的样本数随着维数升高而呈指数级增长。面对高维数据，常规的最小二乘方法不再适用，为了提高模型的可解释性和预测的准确度，变量选择变得很重要。如何高效地从众多的变量中筛选出对因变量有重要作用的若干个变量，是在对指纹图谱进行分析时亟需解决的问题。

目前国家药典采用定量测定中药材中某一活性成分或有效成分即小分子成分的含量的高低来评价其质量。但研究证明，中药的疗效是来自其多种“活性成分”之间的协同作用，甚至是被普遍公认的有效的“活性成分”与“非活性成分”之间的协同作用或“生克作用”才能达到中药的疗效，而不是某一活性成分单独作用的结果。在中医理论指导下的中药，任何一种活性成分均不能全面反映中医用药所体现的整体疗效。

发明内容

本发明提供了一种铁皮石斛的质量检测方法，通过一代测序鉴定石斛药材的品种，利用Lasso方法筛选变量建立铁皮石斛中的化学小分子成分的相关特征指纹图谱模型，通过一代测序和相关特征指纹图谱模型准确评价铁皮石斛的药材的质量。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：