[发明专利]人参皂甙Rg1在制备脊髓损伤修复药物的应用及大鼠脊髓损伤模型的构建方法

说明书

技术领域

本申请属于生物工程领域，具体地说，涉及一种人参皂甙Rg1在制备脊髓损伤修复药物的作用及大鼠脊髓损伤模型的构建方法。

背景技术

脊髓损伤(spinalcordinjury，SCI)是临床常见的一种致残性严重创伤，其后果是神经元死亡及轴突断裂、神经支配功能的丧失，导致患者发生严重的生理、心理和社会交往的障碍，同时给社会和家庭带来沉重负担，其治疗是医学界长期的难题和研究热点。传统观点认为脊髓损伤后星形胶质细胞(astrocyte，AS)增殖、胶质瘢痕和空洞形成是阻碍损伤脊髓轴突有效再生和生长的主要因素。而近年来随着神经生理学、神经细胞生物学、分子生物学飞速发展，脊髓损伤的病理生理、修复机制的研究得以不断深入，最新研究表明脊髓损伤后AS反应和胶质瘢痕微环境对神经元存活、轴突再生、连接，甚至内源性神经干激活、分化均有重要作用，从而是决定脊髓损伤后神经结构和功能修复的关键因素。

活化AS、胶质瘢痕及其间促进修复和抑制性细胞因子共同构成的微环境是决定脊髓损伤修复的关键因素。因此，发展更好的药物或分子工具以合理干预脊髓损伤后AS各阶段病理生理应答并调控上述各种细胞因子分泌和表达，使之达到最佳平衡状态，启动内源性修复机制，充分发挥其对神经支持、保护作用及对轴突再生的促进作用，调控其成熟期的过度增殖，诱导新生的AS成线性排列，改善胶质瘢痕结构和微环境，为轴突再生和延长提供理想的支架和通道，是当前脊髓损伤修复研究的一个关键环节和迫切任务。

然而目前该领域研究大多建立在胶质瘢痕阻碍神经再生的理论之上，致力于单方面抑制AS活化和胶质瘢痕形成，用药物、体外诱导、基因技术等实验手段，只取得了有限成果，且过度抑制AS活化和胶质瘢痕形成，不利于甚至有碍脊髓损伤修复。

人参作为传统中药具有补气安神、增强神经系统功能的药效，对中枢神经系统有兴奋和抑制双重作用，其中植物甾醇人参皂甙Rg1(ginsenoside Rg1)是作用于神经系统的主要成分之一，其神经药理作用包括神经元的营养、保护、延缓凋亡，调节神经递质活性及抑制神经毒性、抗氧化应激和抗凋亡作用，可明显提高体外培养神经元及神经干细胞的存活率和增殖能力，并具有促进周围神经轴突生长作用。

虽然脊髓损伤的大体机制基本阐明，但是基于植物甾醇人参皂甙Rg1的治疗脊髓损伤的病理生理机制非常复杂，人们对此认识并不全面和深入，因而导致了一直困扰着临床医师对脊髓损伤的治疗，为了寻求新的、有效的治疗，更透彻地阐明脊髓损伤所涉及的复杂机制，更有效地评估脊髓损伤后干预手段的效果，需要有可靠性高、重复性好的符合临床的脊髓损伤模型，由于无法依靠临床开展系统的病理学研究，通过建立动物模型进行实验研究则显得尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本申请针对上述的问题，提供了一种人参皂甙Rg1在制备脊髓损伤修复药物的应用及大鼠脊髓损伤模型的构建方法。

为了解决上述技术问题，本申请公开了一种人参皂甙Rg1在制备脊髓损伤修复药物的应用。

本申请还公开了一种用于检测Rg1对脊髓损伤修复作用的大鼠脊髓损伤模型的构建方法，包括以下步骤：

1)将大鼠麻醉并固定：所有大鼠经1mL/100g水合氯醛腹腔注射麻醉后取俯卧位固定于操作台；

2)确定椎体序列：用食指沿胸椎棘突从上至下触摸，感知一明显增大的棘突，为T10或T11棘突；

3)胸背部备皮，碘伏消毒、铺巾，沿T10或T11棘突上缘作一长1.5cm-2cm的后正中切口，分离深筋膜，显露棘突，钝性剥离双侧椎旁肌，用3-0丝线将椎旁肌向两侧牵拉固定，继续钝性剥离T9或T10椎板；用显微蚊钳咬除T9或T10棘突及两侧椎板，暴露硬脊膜并保持其完整性；

4)将动脉血管夹两头对称置于暴露的脊髓两侧，并保证动脉夹头端触及椎体后缘，此时突然释放动脉夹，使脊髓遭受突然的夹闭损伤，2min后将动脉夹取下，此过程中大鼠后肢痉挛性抽搐，尾巴向两侧快速摆动，持续数秒；充分止血后由内而外逐层缝合，碘伏棉球消毒并清除切口周缘血迹；将大鼠置于恒温台上复温，待麻醉清醒后，大鼠后肢及尾部出现软瘫，即造模成功，

5)术后护理。

进一步地，术后护理具体为：分笼饲养，术后每隔8h行人工排尿一次，挤压膀胱后及时清理会阴，保持会阴干燥，直至动物排尿反射恢复，期间观察大鼠状态，必要时为预防感染，每只大鼠肌注50mg/kg头孢唑啉，持续3天。

进一步地，动脉血管夹的夹闭力量为15g。