[发明专利]一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法有效
| 申请号： | 201710067351.8 | 申请日： | 2017-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN107354130B | 公开（公告）日： | 2020-09-29 |
| 发明（设计）人： | 吴韶清;欧志英;金宇林;李发涛;唐婕;吴洁莹;陈劲松;谢闺娥;陆琰;梁绮华;刘东 | 申请（专利权）人： | 广州市妇女儿童医疗中心(广州市妇幼保健院;广州市儿童医院;广州市妇婴医院) |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 510623 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胎盘 绒毛 膜间充质 干细胞 分离 方法 | ||
1.一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，包括如下步骤：
1)取人胎盘绒毛膜组织，剪成1-3cm条块状，用生理盐水充分冲洗，并称量绒毛膜湿重；
2)用手持式电动匀浆器处理绒毛膜至大小为0.1～0.3cm3的细小颗粒，再次用生理盐水冲洗至澄清；
3)再次用匀浆器处理至大小为0.1～0.5mm3的微小颗粒后，离心去除上层血细胞；
4)沉淀中加入同体积的胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ，于37℃消化0.5～3h；
5)用生理盐水离心洗涤两次后，沉淀中加入培养基，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；
6)第7天弃除组织块和培养液，用生理盐水冲洗培养瓶底后，加入新鲜培养基，之后每3天更换培养基至细胞融合度达80-90％，用胰酶消化传代，即得人胎盘绒毛膜间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎盘绒毛膜组织取自产后6小时内，无老化钙化、无传染性疾病的胎盘，并用生理盐水充分冲洗绒毛膜组织上的血液。
3.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎盘绒毛膜组织厚度为0.3～0.5cm。
4.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎盘绒毛膜组织为整个胎盘的绒毛膜组织。
5.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：匀浆器处理时，绒毛膜组织与生理盐水的体积为1：(2～3)。
6.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：匀浆器处理时，温度为4～25℃。
7.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：离心去除上层血细胞的离心条件为：转速300～500r/min，5min，4℃。
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