[发明专利]一种土壤蛋白质的提取方法在审
| 申请号： | 201710068838.8 | 申请日： | 2017-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN106632582A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 李乃荟;吴凤芝;陈宇飞;周新刚;刘守伟;潘凯 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/30 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅,吴爱琴 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 土壤 蛋白质 提取 方法 | ||
1.一种土壤蛋白质的提取方法，包括下述步骤：
1)向土壤样品中加入土壤蛋白质提取缓冲液，震荡，静置；
2)置于沸水中加热，于0℃冰水中冷却，震荡，离心；
3)将上清液过滤，向已过滤的上清液中加入Tris饱和酚，震荡，离心，弃去上清液，收集下层苯酚溶液；
4)向下层苯酚溶液中加入甲醇醋酸铵溶液，-20℃放置6h-8h；
5)离心，将上清液移出，收集蛋白质沉淀，再将蛋白质沉淀用丙酮清洗，冻干，得到蛋白质干粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述土壤蛋白质提取缓冲液为中性的蛋白质提取缓冲液，具体可为pH6.8的蛋白质提取缓冲液；
所述pH6.8的蛋白质提取缓冲液的配制方法为：称取十二烷基硫酸钠1.25g，三羟甲基氨基甲烷1.2114g，NaCl 0.8766g，二硫苏糖醇0.386g，加入70ml双蒸水溶解，使用浓盐酸调节pH至pH 6.8，最后使用双蒸水定容至100ml，即可。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述土壤样品与土壤蛋白质提取缓冲液的配比为1.8g-2.2g：5ml；
所述震荡的速度为3000rpm-3200rpm，时间为10-20min；
所述静置的时间为3-5min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述加热的时间为5-15min；
所述冷却的时间为3-5min；
所述震荡的速度为3000rpm-3200rpm，时间为5-10min；
所述离心的条件为：4℃下4500-5500rpm离心75-10min。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述过滤采用0.45μm的尼龙滤膜；
所述Tris饱和酚的pH值为8.0；
所述上清液与Tris饱和酚的配比为3-4ml：2ml；
所述震荡的速度为3000rpm-3200rpm，时间为15-30min；
所述离心的条件为：4℃下10000-13000rpm离心15-20min。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤4)中，所述甲醇醋酸铵溶液的浓度为0.1M；所述甲醇醋酸铵溶液与苯酚溶液的体积比为5-6：1。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：步骤5)中，所述离心的条件为：4℃下13000-15000rpm离心15-20min；
所述清洗进行多次，具体可为3次；
所述冻干的温度为-80℃。
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