[发明专利]两个小分子肽及其制备方法和在制备抗病毒药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于海洋生物领域，具体涉及一个环五肽化合物和一个线性肽化合物及其制备方法和在制备抗HSV-1病毒药物中的应用。

背景技术：

海洋生物资源丰富，代谢产物类型多样，结构新颖，有较好的生物活性，是近年来研究学者的焦点。肽类化合物是海洋生物代谢产物中的一大类型，目前发现的海洋肽类具有细胞毒、抗菌、抗污损等活性，另一类具有神经药理活性，如芋螺的肽类毒素Ziconotide具有镇痛作用，是第一个海洋药物(商品名为Prialt)，被用作治疗脊髓损伤引起的慢性疼痛。在海洋微生物的次级代谢产物中，肽类化合物也占有重要的比例，海洋细菌的代谢产物超过56％的是肽类化合物。

孢疹病毒属于孢疹病毒家族的成员，具有α，β，γ三个类型，其中HSV-1S属于α型。HSV的临床表现是多样性的，一般为轻症或无症状感染，但新生儿和免疫低下者能引起严重的感染。HSV-1主要通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触感染，引起口唇、咽、眼及皮肤感染，少数则引起生殖感染。当原发型孢疹感染后，由于其残存的病毒长期潜存与三叉神经(HSV-1)，当机体体抗力降低或某些激发因素如发热、受凉、感染等会引起复发性感染。

目前临床主要用核苷类药物治疗单纯孢疹病毒感染，适用于HSV-的原发性和复发性感染，对潜伏期则难以奏效，常用的药物主要是阿昔洛韦及其类似药物，选择性高，对正常细胞毒性小，但长期使用有一定的副作用，引起接触性皮炎等，产生耐药朱，因此，开发利用新的资源，寻求更好地抗HSV药物已势在必行。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供具有抗HSV-1病毒活性的一个新环五肽化合物Aspergillpeptid e D和一个新线性肽化合物Aspergillpeptide E。

本发明的一个新的环五肽化合物和一个新的线性肽化合物，其结构式如式(Ⅰ)所示，

其中化合物1：命名为Aspergillpeptide D；化合物2：命名为Aspergillpeptide E。

本发明的环五肽化合物Aspergillpeptide D、线性肽化合物Aspergillpeptide E是通过以下方法制备的，该方法包括以下步骤：

(a)制备曲霉菌Aspergillus sp.SCSGAF 0076CCTCC NO：M 2012397的发酵液；

(b)将步骤(a)得到的发酵液用大孔树脂吸附，接着用水冲洗大孔树脂去掉培养基成分，再用甲醇或乙醇冲洗大孔树脂得到甲醇或乙醇提取物；也可将步骤(a)得到的发酵液用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；

(c)将步骤(b)所述甲醇提取物、乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过正相硅胶柱层析，依次用二氯甲烷与甲醇体积比例分别为100％、90％、80％、70％、60％和50％的二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，分别收集用二氯甲烷体积分数为90％和60％的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂冲洗下来的组份A，B，这两个组分分别经过硅胶柱和凝胶柱层析得到粗品，经HPLC纯化，分别得到化合物Aspergillpeptide D以及化合物Aspergillpeptide E。

步骤(a)中所述的发酵液可通过以下方法制备：将曲霉菌Aspergillus sp.SCSGAF 0076CCTCC NO：M 2012397接种到曲霉属真菌适用的培养基中，在通常的发酵条件下制得，优选的制备方法是将曲霉菌Aspergillus sp.SCSGAF 0076CCTCC NO：M 2012397在曲霉属真菌适用的平板培养基中生长，待真菌长出孢子后，用竹签将真菌从平板上至盛有水的三角瓶中，用移液枪将真菌液接种到培养基中(1L三角瓶中盛有300ml培养基)，于室温静置培养30天，得到发酵液，所述的培养基为：每升含山梨醇20g，酵母膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.3g，味精10g，色氨酸2g，KH₂PO₄ 0.5g，麦芽糖20g，海盐30g，甲醇5ml，余量为水，pH 6.5。

步骤(b)所述的浓缩采用减压浓缩。