[发明专利]检测寨卡病毒的引物、试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术，具体是涉及一种检测寨卡病毒的引物、试剂盒和方法。

背景技术

寨卡(Zika)病毒主要通过埃及伊蚊叮咬传播，患者、隐性感染者和感染寨卡病毒的非人灵长类动物是该病的传染源。寨卡病毒疫情通过蚊虫叮咬传播，感染后症状与登革热相似，包括发烧、疹子、关节疼痛、肌肉疼痛、头痛和结膜炎(红眼)。寨卡病毒感染者中，只有约20％会表现轻微症状，如发烧、皮疹、关节疼痛和结膜炎等，症状通常不到一周即可消失。然而，如果孕妇感染，胎儿可能会受到影响，导致新生儿小头症甚至死亡。有研究发现寨卡病毒也可以通过母婴途径传播，包括胎儿宫内感染或者在分娩过程中受到感染，有报道发现在乳汁中可以检测到寨卡病毒的核酸。目前，全球超过150万人感染寨卡病毒，中国感染人数较少，但感染人数不断增加，寨卡病毒感染已成为威胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题。寨卡病毒感染一年四季均可发病，也可存在某个地区或者季节蚊虫孳生繁殖快而导致爆发感染的可能。我们需要予以重视，并且要研发一种快速、准确的方法用作其检测方法。

寨卡病毒的核酸是由三个结构基因和五个非结构基因组成，具有10,794个核苷酸的ss(+)RNA基因组。寨卡病毒有原型MR766和ZIKA EC 2007两个全基因组序列在GenBank中公开，它们的序列具有89％的同源性，具有97％的氨基酸相似性。

环介导恒温扩增技术(Real-time loop mediated isothermal amplification，Real-time LAMP)是21世纪初期研发的一种新技术，是一项适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，针对靶序列上6或8个特异区域设计4或6条特异引物，在链置换Bst DNA聚合酶下快速扩增目的片段，扩增时间只需60min。目前，环介导等温扩增技术已广泛应用于国内外各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中。

实时荧光LAMP技术是LAMP技术的优化，该技术可直接用临床血液样本提取核酸，然后便可进行扩增，与传统的检测技术相比，该技术的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作简单、快速，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，通过检测荧光信号强弱可判断检测结果，适用于对疾病的快速诊断。将其用于寨卡病毒的快速诊断，可大大地缩短检验报告时间，更加快速地提供诊断寨卡病毒感染的依据，而后及时给予患者适当的治疗，以免耽误病程。

Rea-LAMP作为一种扩增基因的检测技术，也有其缺陷，例如气溶胶的污染是不可避免的，这也是导致Rea-LAMP出现假阳性的主要原因；Rea-LAMP比PCR通用性差，Rea-LAMP主要用作诊断或检测技术，不用于克隆目的；Rea-LAMP反应体系加入中引物数量较多，增加了引物与引物之间的相互作用，例如形成二聚体机会增加；Rea-LAMP检测技术不如PCR成熟。

到目前为止，尚未有研究对Real-time LAMP检测寨卡病毒进行系统的评价与分析。为检测寨卡病毒提供新的检测技术，我们试行运用Real-time LAMP技术检测寨卡病毒，寻找高特异性的检测寨卡(Zika)病毒的Real-time LAMP试剂盒。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种检测寨卡(Zika)病毒的试剂盒，该试剂盒具有灵敏度高、特异性强的优点。

实现上述目的的技术方案如下。

一种检测寨卡病毒的试剂盒，包括有序列组成为SEQID.NO.1-SEQID.NO.2的内引物，序列组成为SEQID.NO.3-SEQID.NO.4的外引物。

在其中一个实施例中，还包括有序列组成为SEQID.NO.5-SEQID.NO.6的环引物。

在其中一个实施例中，在检测体系中，所述内引物的浓度为40±0.5μM、所述环引物的浓度为20±0.5μM、所述外引物的浓度为5±0.5μM。

本发明的另一个目的是提供一种检测寨卡病毒的引物。

实现上述目的的技术方案如下。

一种检测寨卡病毒的引物，包括有序列组成为SEQID.NO.1-2的内引物，序列组成为SEQID.NO.3-4的外引物。

在其中一个实施例中，还包括有序列组成为SEQID.NO.5-6的环引物。

本发明的另一个目的是提供一种检测寨卡病毒的方法。

实现上述目的的技术方案如下。