[发明专利]一种重金属污染土壤修复剂制备方法

权利要求书

1.一种重金属污染土壤修复剂制备方法，其特征在于：该修复剂为菌悬液和膨胀蛭石的组合，膨胀蛭石经无菌处理后，将膨胀蛭石与菌悬液以质量比1:2~1:4的比例混合在一起，避光进行吸附培养，1~3小时后吸附平衡生成微生物的固定化；所述菌悬液是将电镀综合废水生化处理活性污泥通过分离、纯化及驯化得到的耐受力最高的菌株接种至液体培养基中培养1~3天得到，菌悬液存放于4℃冰箱中；

所述液体培养基由牛肉膏2~4g、蛋白胨4.5~5.5g、NaCl 2~3g、蒸馏水1000mL混合制成；

所述耐受力最高的菌株制备包括如下步骤：

（1）土悬液制备：

取泥样10g于装有90mL无菌水的锥形瓶中，用振荡器振荡，摇匀后将土悬液一次稀释到10^-3、10^-4、10^-5备用；所述泥样是采用电镀综合废水生化处理活性污泥；

（2）水样稀释：

取待修复的土壤反复淋洗三遍，将淋洗所得的污水1mL装入49mL无菌水的三角瓶中，混匀后将水样依次稀释到10^-3、10^-4、10^-5备用；

（3）分离培养基：

牛肉膏蛋白胨培养基中加入不同浓度的镉、铜作为筛选耐镉、铜细菌培养基；

（4）分离纯化：

在培养皿中倒入步骤（3）通过加入不同浓度的镉、铜所得到的牛肉膏蛋白胨培养基，冷却凝固，分别取0.1mL的10^-3、10^-4、10^-5浓度的土悬液及0.1mL的10^-3、10^-4、10^-5浓度的水样稀释液,用涂布法将相同浓度的土悬液和水样稀释液涂匀在平板上，30℃培养5~7天，然后挑选出培养皿上生长的单个菌落，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线，反复纯化，将纯化的菌株放入4℃冰箱中保存备用；

（5）细菌的驯化：

在固体培养基中加入镉、铜标准溶液，并将步骤（4）通过分离纯化获得的菌株接种到镉、铜离子的含量分别为20mg/L的固体培养基中，再次培养驯化，将驯化出的菌株一次接种到镉、铜浓度分别为30、40、50、60、70、80、90、100mg/L的筛选培养基中，观察其生长情况，逐步淘汰耐镉、铜能力差的菌株，并记录不同细菌的最高耐受浓度，筛选出耐受力最高的菌株；所述固体培养基由牛肉膏2~4g、蛋白胨4.5~5.5g 、NaCl 2~3g、琼脂10~20g、蒸馏水10~20g混合制成；而筛选培养基由牛肉膏2~4g、蛋白胨4.5~5.5g、NaCl2~3g、蒸馏水1000mL，加入一定浓度含镉、铜溶液混合制成。