[发明专利]一种海参的DNA条形码分子鉴定方法

权利要求书

1.一种海参的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于鉴定的参为象牙参Holothuria fuscopunctata。

2.根据权利要求1所述的DNA条形码分子鉴定方法，其步骤主要包括：

(1)从待测的海参组织中分离提取总DNA；

(2)以该DNA为模板用一对引物，通过聚合酶链式反应扩增出海参COI基因；

(3)然后取适量步骤(2)的聚合酶链式反应扩增出的COI基因产物用琼脂糖电泳分离鉴定扩增产物大小，然后进行测序；

(4)根据测序结果，进行分析比对，如果与基因序列SEQ ID NO.1的同源性在99％以上，即可判断所述的待测组织即为象牙参来源。

3.根据权利要求2所述的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于引物的DNA的序列为：

COIef1：5’-TATTGATTGGAGGGTTTG-3’；

COIer1：5’-TCACAGTAGGAATGGACG-3’。

4.根据权利要求2所述的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于所述聚合酶链式反应的扩增条件为94℃预变性2分钟94℃预变性30秒，45℃退火35秒，72℃延伸45秒，35个循环；72℃延伸7分钟。

5.根据权利要求2所述的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于扩增产物的扩增片段为678bp，用1％-2％琼脂糖电泳检测。

6.根据权利要求2所述的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于所述海参的DNA条形码标准检测基因为CO I基因，具有如下所述的基因序列SEQ ID NO.1：

TATTGATTGGAGGGTTTGGCAAATGGCTCATTCCCCTGATGATAGGAGCCCCAGACATGGCCTTCCCCCGGATGAAAAAAATGAGTTTCTGACTAGTTCCCCCTTCATTCATTCTTCTCCTAGCCTCAGCAGGCGTAGAAAGAGGAGCAGGCACAGGATGAACCATATACCCACCATTATCCAGAAACATTGCCCATGCTGGAGGGTCTGTTGACTTAGCTATTTTCTCTCTACACTTAGCCGGAGCCTCATCCATTCTAGCTTCTATAAACTTTATTACCACAATTATAAACATGCGGGCCCCAGGAATAACATTCGACCGTCTTCCTTTATTCGTATGATCAGTTTTCATCACAGCCTTCCTTCTCCTACTTAGGCTACCAGTTCTAGCAGGAGCCATAACAATGCTGCTAACAGACCGGAACATAAAAACAACATTTTTCGACCCCGCAGGAGGAGGAGACCCAATTCTATTCCAACATCTATTCTGATTCTTTGGCCATCCAGAAGTTTACATCCTAATCCTCCCAGGATTCGGAATGATATCACATGTAATAGCTCACTACAGAGGCAAGCAAGAGCCCTTTGGATATCTCGGAATGGTTTACGCAATGGTAGCCATAGGAATCCTAGGATTCCTAGTCTGAGCCCATCATATGTTCACAGTAGGAATGGACG。