[发明专利]人工染色体载体

权利要求书

1.在选自HEK细胞，如HEK293、CHO、COS、NS0细胞、PerC-6、或Sf9细胞的真核生产细胞系中生产蛋白质的方法，包括下述步骤：

a)提供人工染色体骨架，所述人工染色体骨架含有丰富蛋白质的基因座，所述基因座含有开放染色质形成或蛋白质表达的调节元件，

b)将编码所述蛋白质的核酸重组入所述骨架中以生成表达载体，其中所述载体含有异源启动子，

c)将所述表达载体线性化并整合入真核宿主细胞系中以获得真核表达细胞系，其中至少10个拷贝的所述人工染色体稳定整合至所述宿主细胞的染色体中，所述表达细胞系具有至少30次传代的稳定性；

d)培养所述表达细胞系以生成所述蛋白质，并

e)分离所述蛋白质。

2.依照权利要求1的方法，其中所述重组是用重组技术进行的，所述重组技术选自同源重组或整合酶介导的盒交换。

3.依照权利要求1或权利要求2的方法，其中将至少10个最多500个拷贝的所述载体导入所述宿主细胞系中。

4.依照权利要求1至3任一项的方法，其中产生了分泌蛋白。

5.依照权利要求4的方法，其中所述分泌蛋白包括信号肽。

6.依照权利要求4或5任一项的方法，其中所述分泌蛋白选自血清蛋白质，包括免疫球蛋白、免疫球蛋白片段或衍生物、清蛋白、血液因子、多肽激素、细胞因子、趋化因子、酶和生长因子、及它们的衍生物。

7.依照权利要求1至6任一项的方法，其中所述人工染色体是自细菌、噬菌体、酵母或哺乳动物衍生的。

8.依照权利要求1至7任一项的方法，其中所述人工染色体选自下组：BAC、PAC、YAC和粘粒。

9.依照权利要求1至8任一项的方法，其中所述载体含有哺乳动物或昆虫起源的基因座。

10.供权利要求1-9任一项的方法中使用的载体，其基于包括编码分泌蛋白的基因的人工染色体。

11.供权利要求1-9任一项的方法中使用的转基因生产细胞系，载有含同种异基因的基因座的载体。