[发明专利]一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，提供了一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管作为检测抗体标记物，实现了鳞状细胞癌标志物SCCA的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低，对鳞状细胞癌的检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

血清中各种肿瘤标志物的灵敏测定对癌症的早期诊断起着重要的作用；

肿瘤标志物的灵敏检测，在临床上对于肿瘤的早期发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，因此建立快速、灵敏准确检测肿瘤标志物的分析方法成为了当今的研究热点，引起了大家的广泛关注。。

目前电化学免疫传感器已经广泛用于肿瘤标志物的检测，夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。

随着纳米技术的发展，各种纳米粒子广泛的应用于传感器的构建过程中。氧化石墨烯表面有大量的羧基官能团，且具有大的比表面积，良好的电子传递能力和催化性能，能有效吸附固载抗体；负载金纳米粒子的石墨烯具有更好的导电性；二硫化钼是类石墨烯材料，具有很好的催化性能，氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管不仅具有碳纳米管及二硫化钼的优良性能，而且经过磺化、氨基化可以使其固载更多的抗体，大大增加测定的灵敏度；海胆状金钯具有大比表面积，不仅可以起固定抗体，防止碳纳米管堆叠的作用，而且枝晶状的钯纳米材料大大增加了与过氧化氢的接触面积，提高了对过氧化氢的催化效果，因此，海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管对过氧化氢的催化作用呈多重的放大作用，从而提高了传感器的灵敏度，降低了检测限。

发明内容

本发明提供了一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用，实现了对鳞状细胞癌标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器应用于鳞状细胞癌标志物的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1） 将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2） 取6 µL、1.0 ~ 2.0mg/mL的Au@GS滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3） 继续将6 µL、5 ~ 15 µg/mL的鳞状细胞癌标志物捕获抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4） 继续将3 µL、1.5 ~ 3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；滴加6µL、0.0005 ~ 50ng/mL的一系列不同浓度的鳞状细胞癌抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥；

（5） 将6 µL、2.0~ 3.0 mg/mL的海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面，置于4℃冰箱中晾干，制得一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器。

2.一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法，所述Au@GS的制备，步骤如下：