[发明专利]高产洛伐他汀枝状枝孢菌Cc‑106菌株及其用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物生物技术领域，涉及1株液体发酵生产Lovastatin的枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）Cc-106菌株、用途和发酵生产方法。

背景技术

Lovastatin是各国公认的降低胆固醇的理想药剂，具有高效、低毒、安全的特点，它能选择性抑制羟甲基戊二酸辅酶A（HMG-CoA）还原酶活性，并阻断胆固醇生物合成，近年来在临床治疗方面应用十分广泛。从1979年，日本学者远滕章（Akira Endo）教授从红色红曲霉（Monascus ruber）的培养液中分离出一种能够强力抑制胆固醇合成的活性物质，命名为Monacolin K（莫纳可林K）开始，时隔1年，美国Albert等从土曲霉（Aspergillus terrers）中发现了相似的物质，并命名为Mevinolin，现称Lovastatin。此后发现Lovastatin存在于包括侧耳属（Pleurotus）、茎点菌属（Phoma）、青霉属（Penicillium）、发光类脐菇 （Omphalotus olearius）在内的多种真菌中。

枝孢菌（Cladosporium）属于半知菌，是一类能够产生分生孢子的霉菌；孢子分布广泛，室内和室外空气中含量丰富；菌落褐绿色，经常与曲霉、青霉混淆；但是枝孢菌的菌丝是有颜色的，菌落整体呈现深色。有文章和专利报道，枝孢菌可用于：① 纤维素酶、木质素酶、超氧化物歧化酶、脂肪酶等酶制剂的生产，② 可产生紫杉醇等抗肿瘤、抗细菌真菌等活性代谢产物，③ 可用作微生物农用杀虫剂等。

发明内容

针对市场上Lovastatin需求日益增长，生产Lovastatin优良工业菌株的缺乏等的问题。本发明的目的是提供1株高产Lovastatin枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）Cc-106菌株和发酵生产Lovastatin的方法。

本发明所述枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）Cc-106菌株，保藏编号为：CCTCC M 2016380，保藏地为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2016年7月7日。

Cc-106菌株的形态特征：在PDA 培养基上28 ℃培养7 d形成较典型的菌落。菌落突点状，褐绿色，菌丝厚绒毛状，较致密，与培养基结合紧密，不易挑起，菌落背面墨绿色（附图1）。显微镜观察菌丝细胞丝状交织，有分隔，壁光滑或粗糙（附图2）。分生孢子梗直立，在中部形成分枝（附图3）；分生孢子簇生或单生，无隔或有隔，分生孢子椭圆形至梭形，单细胞大小差异较大，长×宽平均大小为 5.5 µm×3.5 µm（附图4）。

ITS rDNA基因序列分析结果表明，其长度为525 bp（附图5），与枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）的进化距离最近（附图6）。根据Cc-106菌株的形态特征，结合枝孢菌属（Cladosporium）分种检索表，将Cc-106菌株鉴定为枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）。

Cc-106菌株具有高产Lovastatin、产孢量多、培养简单等优良特性。在发酵培养基初始pH为5.0~5.5，培养温度为28 ℃条件下，Cc-106菌株通过液体发酵培养基和发酵条件优化后，发酵80 h~136 h，Lovastatin产量可达184 mg/L左右（附图7）；用液相色谱-质谱联用技术分离检测发酵液中的Lovastatin，结果表明分离物的结构、分子量与Lovastatin准品一致（附图8）。枝状枝孢菌Cc-106菌株丰富了生产Lovastatin的菌种。