[发明专利]原位杂交检测口腔肿瘤组织中长链非编码RNA LINC00472试剂的应用

说明书

本发明公开了原位杂交检测口腔肿瘤组织中长链非编码RNA LINC00472试剂的应用，即用于制备口腔肿瘤患者的预后制剂，特别是制备出原位杂交检测法预测口腔肿瘤患者预后的试剂盒。通过研究证实LncRNA LINC00472在口腔肿瘤组织中表达下调，低表达LncRNA LINC00472的口腔肿瘤患者比高表达LncRNA LINC00472的口腔肿瘤患者预后差，因此，将LncRNA LINC00472的表达用于口腔肿瘤患者的预后预测，可以为口腔肿瘤患者的预后提供强有力的分子生物学依据，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码RNA LINC00472的原位杂交探针的应用方法。

背景技术

口腔颌面部恶性肿瘤是常见高发的头颈部恶性肿瘤，容易发生颈部淋巴结转移，预后较差。研究表明，这种肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程，其中抑癌基因的失活与癌基因的激活发挥了关键的作用。

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度超过200nt、缺少特异完整的开放阅读框、无或很少有蛋白编码功能的RNAs分子。最近的研究表明，lncRNAs通过在表观遗传、转录和转录后水平广泛调节基因的表达，它们参与了生物体生长、发育、衰老及死亡等重要生命活动的调控。越来越多的研究表明lncRNAs的异常表达或功能缺失与肿瘤的发生发展密切相关。一些lncRNAs分子在肿瘤的诊断和治疗方面具有重要的意义，且可以作为肿瘤预后判断新的分子标记。目前，已经克隆的人类lncRNAs基因已超过4万多个，但绝大部分lncRNA的功能未知。

我们检测了LINC00472在临床离体肿瘤样本中的表达水平，并分析了LINC00472表达水平与临床病例资料的相关性。我们从口腔肿瘤及相对应的正常对照组织中抽提RNA后通过逆转录，实时定量PCR，检测了LINC00472的表达情况，结果显示LINC00472在口腔肿瘤组织中表达下调。我们随后又利用原位杂交的方法，进一步在存档石蜡样本验证了LINC00472在口腔肿瘤中表达显著下调，因此针对LINC00472的检测制剂可用于口腔肿瘤的辅助诊断，结合临床回访资料进行生存曲线分析发现LINC00472表达低的患者其生存时间短于该lncRNA表达高的患者，因此针对该lncRNA的检测制剂也可以用于口腔肿瘤的预后判断。

发明内容

本发明的目的是提供lncRNA LINC00472的原位杂交探针的应用方法，利用LINC00472序列得到的原位杂交探针可以制备用于口腔肿瘤辅助诊断或者预后预测的制剂。

原位杂交检测口腔肿瘤组织中长链非编码RNA LINC00472的试剂的应用，所述的试剂用于制备口腔肿瘤辅助诊断或者疗效预测制剂；该长链非编码RNA LINC00472的序列如SEQ NO:1所示。

所述的口腔肿瘤辅助诊断或者疗效预测制剂是根据lncRNA LINC00472在口腔肿瘤中的表达情况来辅助诊断和疗效预测，口腔肿瘤患者的lncRNA LINC00472表达显著下调。

所述的原位杂交检测口腔肿瘤组织中长链非编码RNA LINC00472的试剂包括以下用于原位杂交检测LINC00472表达的寡核苷酸探针中的一种或几种：

LINC00472探针1：5’-CAAAACTAGGATTCTGTCTTTGAGGCAGAC-3’

LINC00472探针2：5’-AAGAATGGAAGTGGGAAGAGAGAAAGACTT-3’

LINC00472探针3：5’-TAATTCAGGGGTATCCGTCTTAGTTTAGGC-3’。

所述的原位杂交检测口腔肿瘤组织中长链非编码RNA LINC00472的试剂包括以下阳性对照探针中的一种或几种：