[发明专利]人血清白蛋白与人突变型肝细胞生长因子的融合蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201710077667.5 | 申请日： | 2017-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN108424459A | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 张雁云;金坚;徐栋生;万爱妮;陈蕴;金敏 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院;江南大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K38/18;A61K47/64;A61P1/16 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 融合蛋白 肝细胞生长因子 突变型 人血清白蛋白 人肝细胞生长因子 制备方法和应用 生物活性 表达量 蛋白水解酶作用 生物学活性 分离纯化 药学领域 氨基酸 半衰期 第一区 突变 体内 应用 | ||
1.人血清白蛋白与人突变型肝细胞生长因子的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括人血清白蛋白HSA组成的第一区和人突变型肝细胞生长因子HGF组成的第二区，人血清白蛋白的C末端与人突变型肝细胞生长因子的N末端连接，所述人突变型肝细胞生长因子是指肝细胞生长因子第494位的氨基酸R突变成N、D、K、Q或G。
2.根据权利要求1所述的人血清白蛋白与人突变型肝细胞生长因子的融合蛋白，其特征在于，所述人突变型肝细胞生长因子是指肝细胞生长因子第494位的氨基酸R突变成N。
3.权利要求1所述人血清白蛋白与人突变型肝细胞生长因子的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用重叠PCR技术，将人肝细胞生长因子HGF第494位的氨基酸R突变成N、D、K、Q或G，得到不经过酶切就具有生物学活性的HGF突变体；
(2)利用重叠PCR技术，连接HSA cDNA和步骤(1)获得的HGF突变体cDNA，中间添加肠激酶酶切位点，得到的HSA-HGF融合蛋白基因插入到表达载体，然后将重组载体转化至宿主细胞CHO中表达，从表达产物中分离纯化获得所述融合蛋白。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中将人肝细胞生长因子HGF第494位的氨基酸R突变成N。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pMH3。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为CHO-KS细胞。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述转化是指利用电穿孔法转化至宿主细胞。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化采用的是离子交换层析和亲和层析。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述离子交换层析填料为SPSepharose Fast Flow，所述亲和层析采用的是亲和层析柱，填料为肝素Sepharose FastFlow。
10.权利要求1所述人血清白蛋白与人突变型肝细胞生长因子的融合蛋白在制备治疗肝脏纤维化、肝脏术后修复、肝脏弥漫性损伤药物中的应用。
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