[发明专利]TEM1特异性荧光探针及其应用

说明书

本发明提供了一种TEM1特异性荧光探针，其包括抗TEM1单链抗体、连接子MAL‑PEG‑NH₂和荧光染料ICG‑NHS，其中，所述荧光染料ICG‑NHS通过酰胺键与连接子MAL‑PEG‑NH₂连接，所述抗TEM1单链抗体的C末端为半胱氨酸，并通过硫醚键与连接子MAL‑PEG‑NH₂连接。本发明提供的TEM1特异性荧光探针特异性好，灵敏度高，无细胞毒性，由于抗TEM1单链抗体的分子量较小，其在血清中易于清除，并且免疫原性较小，在体内不易引发特异性反应；另外，本发明的TEM1特异性荧光探针还具有干扰小、穿透力强的优点，适于临床应用。

技术领域

本发明涉及光学分子成像领域，具体涉及荧光探针领域，特别涉及一种TEM1特异性荧光探针及其应用。

背景技术

近年来，光学成像以其非侵袭性、实时、分辨率高等优势广泛应用于肿瘤研究领域，可对肿瘤进行早期诊断，反映肿瘤解剖学结构及代谢情况。吲哚氰绿(IndoCyanineGreen，ICG)是最常见的传统的非特异性荧光探针，主要应用于临床的视网膜血管造影和肝脏功能测定。但是，ICG可以与大部分的清蛋白非特异性的结合，因此极大的限制了其在临床诊断中的作用。

卵巢癌是一种女性生殖系统恶性肿瘤，死亡率高居妇科癌症首位，由于其发病隐蔽，临床症状、体征不典型，目前缺乏有效的早期诊断方法。新近发现肿瘤组织中存在肿瘤内皮细胞标志物(TEM)，其在正常组织中少量表达或不表达，能够成为良好的肿瘤标志物。研究证明内皮唾液酸蛋白(TEM1/endosialin/CD248)在卵巢癌组织中高表达，与体内其他器官差异明显。

发明内容

本发明提供了一种TEM1特异性荧光探针，其包括抗TEM1单链抗体、连接子MAL-PEG-NH₂和荧光染料ICG-NHS，其中，所述荧光染料ICG-NHS通过酰胺键与连接子MAL-PEG-NH₂连接，所述抗TEM1单链抗体的C末端为半胱氨酸，并通过硫醚键与连接子MAL-PEG-NH₂连接。

在本发明一个优选的实施方案中，所述抗TEM1单链抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述抗TEM1单链抗体由SEQ ID NO.1所示的核酸序列编码。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述连接子MAL-PEG-NH₂中，PEG分子量为10K。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述TEM1特异性荧光探针的亲和系数为6-10nM，优选7-9nM。

本发明还提供了TEM1特异性荧光探针在制备诊断卵巢癌的试剂中的用途。

本发明还提供了一种组合物，其包含所述的TEM1特异性荧光探针和药学上可接受的载体。

本发明还提供了一种试剂盒，其包含所述的TEM1特异性荧光探针。

本文所使用的术语“试剂盒”包括本发明的TEM1特异性荧光探针和使用说明书。该试剂盒能进一步包含至少一种另外的试剂。试剂盒通常包括一个标签，简要地说明了试剂盒内容的目的用途。

本发明提供的TEM1特异性荧光探针特异性好，灵敏度高，无细胞毒性，由于抗TEM1单链抗体的分子量较小，其在血清中易于清除，并且免疫原性较小，在体内不易引发特异性反应；另外，本发明的TEM1特异性荧光探针还具有干扰小、穿透力强的优点，适于临床应用。

附图说明

图1为构建质粒的克隆验证的结果；

图2为各表达菌株超声破碎后的SDS-PAGE结果；

图3为不同批次复性的包涵体蛋白的SDS-PAGE结果；