[发明专利]TEM1特异性核磁探针及其应用

说明书

本发明提供了一种TEM1特异性核磁探针，其包括通过交联剂连接的抗TEM1单链抗体和氨基化的SPIO纳米颗粒，其中，所述氨基化的SPIO纳米颗粒通过酰胺键与交联剂连接，所述抗TEM1单链抗体的C末端为半胱氨酸，并通过硫醚键与交联剂连接。本发明还提供了一种TEM1特异性核磁探针的制备方法，TEM1特异性核磁探针在制备诊断卵巢癌的试剂中的用途以及包含该TEM1特异性核磁探针的试剂盒。本发明提供的TEM1特异性核磁探针特异性好，灵敏度高，无细胞毒性，在血清中易于清除，并且免疫原性较小，在体内不易引发特异性反应；另外，抗体分子量较小使其易进入实体瘤周边，并且与受体的结合效率很高，能够获得足够的影像对比度。

技术领域

本发明涉及分子影像学领域，具体涉及核磁探针领域，特别涉及一种TEM1特异性核磁探针及其应用。

背景技术

卵巢癌是一种女性生殖系统恶性肿瘤，死亡率高居妇科癌症首位，由于其发病隐蔽，临床症状、体征不典型，目前缺乏有效的早期诊断方法。超声检查是探查卵巢癌最常用的方法，准确率高于CT，但成像影响因素较多，如患者体型、腹壁厚薄、肿块位置深浅、腹水影响等，且常和肠腔混淆，易出现漏诊。CT对卵巢肿瘤的定位诊断较好，但除了在诊断囊性畸胎瘤方面准确度高以外，对于其他卵巢肿瘤的良、恶性鉴别准确度低于B超。MRI(核磁共振成像)是非损伤性、非辐射性成像方法，但MRI是非特异性的，同时受到磁性纳米颗粒大小的影响，而使结果不稳定。

新近发现肿瘤组织中存在肿瘤内皮细胞标志物(TEM)，其在正常组织中少量表达或不表达，能够成为良好的肿瘤标志物。研究证明内皮唾液酸蛋白(TEM1/endosialin/CD248)在卵巢癌组织中高表达，与体内其他器官差异明显。

分子影像探针是现代生物影像技术发展的一个重要领域，该技术的核心是具有细胞靶向功能的不同种类和大小的分子探针，包括蛋白、抗体、多肽、化学小分子等。抗体靶向技术在肿瘤检测领域的应用越来越受到重视。然而，抗体由于其分子量大，一方面，在血清中不易被清除，且抗体作为外源性蛋白其免疫原性较大，在体内易引发特异性反应；另一方面，抗体分子量大导致其不易进入实体瘤周边，影响它们与受体的结合效率，难以获得足够的影像对比度。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种TEM1特异性核磁探针，其包括通过交联剂连接的抗TEM1单链抗体和氨基化的SPIO(超顺磁氧化铁)纳米颗粒，其中，所述氨基化的SPIO纳米颗粒通过酰胺键与交联剂连接，所述抗TEM1单链抗体的C末端为半胱氨酸，并通过硫醚键与交联剂连接。

在本发明一个优选的实施方案中，所述抗TEM1单链抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述抗TEM1单链抗体由SEQ ID NO.1所示的核酸序列编码。

本发明的编码抗TEM1单链抗体的核酸，可以根据其序列通过现有技术已知的方法合成，如固相亚磷酸酰胺法等。

在本发明另一个优选的实施方案中，氨基化的SPIO纳米颗粒粒径为60-120nm，优选为70-90nm。

在本发明另一个优选的实施方案中，氨基化的SPIO纳米颗粒的横向弛豫率为70-90mM^-1S^-1。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述交联剂是SMCC或sulfo-SMCC。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述TEM1特异性核磁探针含有的铁离子的浓度为0.15-2.2nM，优选0.5-2nM，更优选1-1.5nM。

本发明还提供了一种TEM1特异性核磁探针的制备方法，其包括以下步骤：

(1)合成C末端为半胱氨酸的抗TEM1单链抗体，然后进行纯化及复性；

(2)合成氨基化的SPIO纳米颗粒；