[发明专利]淡水中毒力基因为Stx1的大肠杆菌的快速筛选方法

权利要求书

1.一种淡水中毒力基因为Stx1的大肠杆菌的快速筛选方法，其特征在于它的步骤包括样品收集、预过滤、富集游离DNA、清洗和环介导等温基因扩增鉴定五个步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的样品收集步骤，指原位收集不少于1.0L的待测定淡水。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的预过滤步骤，采用水系微孔滤膜过滤所收集的淡水样品，除去不溶性物质。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的水系微孔滤膜孔径为0.45μm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的富集游离DNA步骤，首先向过滤后的样品中加入HCl或H₂SO₄，调节pH至4.9～5.8，再采用硅胶膜过滤，富集游离DNA到膜上。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的清洗步骤是在样品完全过滤后，再加上纯水，洗去干扰小分子和离子。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的环介导等温基因扩增步骤，首先将硅胶膜平均分成4份，每份装入一个反应管，然后加入包括引物、酶在内的扩增反应试剂和指示剂，封闭反应管，放入61-65℃温度下反应；同时做阳性和阴性对照，指示剂颜色变化指示环介导等温基因扩增结果，阳性结果说明所测定淡水样品中有目标基因，即表明毒力基因为Stx1的大肠杆菌具有存在可能性。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的反应管是透明的玻璃管、有机玻璃管或塑料管。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的指示剂为钙黄绿素或羟基萘酚蓝。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的各步骤，均采用无菌、无DNA污染的洁净器具。